ＷＷＷ．ｓｙ０ｋｚｚ。ｃｏｍ ２ｏ１５年７月下一 重琵蓬疆 致仔猪腹泻大肠杆菌的血清型分析研究 宋放珠 （海南州畜牧兽医工作站，青海共和摘８１３０００） 要：从青海省海南州共和、贵德两县５个规模化养猪场腹泻仔 圆、红色菌落；在普通营养琼脂上形成圆形、边缘整齐、隆起、 猪病例中采集新鲜仔猪粪便样品６５份，分离出疑似大肠杆菌纯化 光滑、灰白色的菌落；在伊红美蓝琼脂（ＥＭＢ）上形成带金属光 并鉴定，对鉴定出的疑似菌进行血清型检测，确定优势血清型， 以便在针对性的对症下药。 关键词：仔猪腹泻；致病性大肠杆菌；血清型鉴定 １材料 １．１病料采集 从共和、贵德两县５个规模化养猪场采集腹泻仔猪的新鲜粪便 样品。 １．２相关仪器 微量移液器、水浴箱、冰箱、恒温培养箱、振荡水浴锅、超 净工作台、肠杆菌科细菌编码生化鉴定管、电子天平及各类玻璃 器皿。 １．３相关培养基和试剂 伊红美兰琼脂培养基（ＥＭＢ）、麦康凯琼脂、营养琼脂斜 面、营养肉汤、水解酪蛋白琼脂。 ２方法 ２．１细菌分离培养 按照常规方法”一 进行细菌伊红美兰琼脂平板（ＥＭＢ）划线、 分离培养，３７℃培养２４ ｈ，选取单个疑似菌落接种于普通营养琼 脂进行纯培养，３７。Ｃ培养２４ ｈ观察结果，对可疑菌落进行涂片， 革兰氏染色镜检。 ２．２生化试验 将分离纯化的可疑大肠杆菌菌株接种于肠杆菌科细菌生化编 码微量鉴定管内，于３７￣Ｃ培养２４ｈ后，对细菌生化反应结果进行判 断并编码。 ２．３溶血性试验 将经生化反应鉴定出的疑似大肠杆菌，接种５～１０％的绵羊脱 纤全血琼脂平板，３７￣Ｃ培养２４ ｈ，观察记录溶血现象。 ２．４血清型鉴定 用２０种猪源大肠杆菌常见单因子“Ｏ”抗原血清分别对分离 鉴定得到的致仔猪腹泻大肠杆菌进行血清型鉴定。 ２．５抗原的制备 将被检菌株划线接种于麦康凯琼脂平皿，置３７℃培养２４ｈ后 挑选光滑、圆整的红色菌落１—２个，接种半固体小管，３７￣Ｃ培养 ２４ｈ。取半固体培养物接种于琼脂斜面小管，置３７￣Ｃ培养２４ｈ。用 ０．５％石炭酸生理盐水２ｍＬ冲洗琼脂斜面小管培养物，置试管中制 成浓稠悬液，然后于１２１。ｃ高压２ｈ，破坏其“Ｋ”抗原，制成高压 抗原。 ２．６玻板凝集反应 取高压抗原与大肠埃希氏菌单因子血清置玻板上混匀０．５ｍｉｎ 内观察凝集反应。 ３试验结果 ３．１大肠杆菌的分离鉴定结果 将病料在麦康凯琼脂上划线培养２４ｈ后，形成中等大小、椭 泽的紫黑色菌落；革兰氏染色镜检为阴性；中等大小钝圆杆状的 细菌，单个或成对存在，所有特征符合大肠杆菌的形态。最终分 离出符合大肠杆菌形态特征的５２株分离菌，分离率为８０％。 ３．２生化试验 对５个猪场的５２株分离菌进行了生化鉴定，结果显示４６株分离 菌符合大肠杆菌的生化特征。鉴定率为８８．４６％。 ３．３溶血性试验 对生化反应鉴定的４６株大肠杆菌进行溶血性实验结果：７株出 现６溶血现象，２８株出现０【溶血现象，１１株溶血现象不明显。有 溶皿『生的菌株占总分离株的７６．０８％（３５／４６），可认为分离株细菌 大部分具有致病性。 ３．４血清型鉴定 对５２株分离的疑似大肠杆菌的血清型进行鉴定。除３株自 凝，４株未定型外，共定型出４５株，占分离株的８６．５４％。这些定 型菌株涵盖了１２种血清型，其中Ｏ 血清型的有１４株，占定型株 的３０．４３％；Ｏｌ １有７株，占定型株的１５．２２％；Ｏ ，９有５株，占定型株 的１０．８７％；２株及１株的血清型的有Ｏ６、Ｏ９、Ｏ２０、Ｏ Ｏ４５、Ｏ ０ｌ０１Ｏｌ３ Ｏ１４７。 、４讨论 本次试验中Ｏ，；、Ｏ 、Ｏｌ ，三种血清型共占定型菌株的 ５７．７７％，可认定Ｏ ，、Ｏ 。和Ｏ 为优势血清型。根据刘书亮等 调 查发现四川省以０ 、Ｏ 、Ｏ ，、Ｏ ，Ｏ 、Ｏ 为优势血清型；王红 琳等 认为湖北省则以０１ Ｏｌ０ｌ、Ｏ９３、Ｏ Ｏ１ Ｏｌ４１、Ｏ１５７为优 势血清型。相比较可以看出：各地区的优势血清型存在较大的差 异，多种致病性大肠杆菌血清型的存在，给猪大肠杆菌病的防治 带来了很大的困难，优势血清型的确定，对各地在进行免疫预防 时，可以选用与当地的优势血清型相吻合的疫苗，对该病的诊治 提供了条件。 ５结论 （１）从海南州共和、贵德两县５个规模化养猪场采集到６５份 粪样，通过分离培养、生化鉴定、溶血性等相关试验，分离并鉴 定出大肠杆菌５２株。 （２）在５２株大肠杆菌分离株中，用大肠杆菌“Ｏ”因子血清 定型了４６株菌，这些定型菌株覆盖了１２个血清型。其中Ｏ Ｏ 和Ｏ 三种为海南地区致仔猪腹泻大肠杆菌的优势血清型。 参考文献 ［１ 白文彬，于康震．］动物传染病诊断学［Ｍ］．北京：中国农业出版社， ２０ｏ２． ［２】潘树德，马兴元．仔猪致病性大肠杆菌的分离［Ｊ】．辽宁畜牧兽医， ２０００，（４）：１４—１５． ［３】刘书亮，王红宁，陶勇，等．四川规模化猪场仔猪黄、白痢Ｅ．ｃｏｌｉ 的分离鉴定［Ｊ］．中国预防兽医学报，２００１，２３（５）：３６７—３７１． ［４】王红琳，熊忠良，周绍凤，等．湖北省仔猪致病性大肠杆菌血清 型鉴定『Ｊ］．动物医学进展，２００２，２３（３）：６８—６９．
