作为STING激动剂的环状二核苷酸[发明专利]

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 CN 112424212 A(43)申请公布日 2021.02.26

(21)申请号 201980047682.2(22)申请日 2019.07.16(30)优先权数据

62/699001 2018.07.17 US(85)PCT国际申请进入国家阶段日2021.01.15(86)PCT国际申请的申请数据

PCT/IB2019/056075 2019.07.16(87)PCT国际申请的公布数据WO2020/016782 EN 2020.01.23(71)申请人 詹森生物科技公司地址 美国宾夕法尼亚州

(72)发明人 S·伊曼纽尔　M·里希特　

P·J·康诺利　J·P·爱德华兹　王广义　S·K·塔希康达　(54)发明名称

作为STING激动剂的环状二核苷酸

(57)摘要

本发明公开了用于治疗受STING调制的影响的疾病、综合征或障碍的化合物、组合物和方法。此类化合物由式(I)表示，

L·贝格曼　G·比格南　W·B·G·克依培思　M·维耶洛夫耶　J·W·J·F·图林　

(74)专利代理机构 中国专利代理(香港)有限公

司 72001

代理人 黄登高　黄希贵(51)Int.Cl.

C07H 21/02(2006.01)C07H 21/04(2006.01)A61P 35/00(2006.01)A61P 37/02(2006.01)

权利要求书29页 说明书112页

其中R1、R1'、X1、

B1、R2、R2'、B2、X2、R3、Z‑M‑Y和Y1‑M1‑Z1如本文所定

义。CN 112424212 ACN 112424212 A

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1. 一种式(I)的化合物：

(I)

其中

B1和B2独立地为b1、b2、b3、b4、b5、b6、b7、b8、b9、b10、b11、b12、b13、b14、b15、b16、b17、b18、b19、b20、b21、b22、b23、b24、b25、b26、b27、b28、b29或b30：

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R1为氢；羟基；氟；任选地被取代的C1-3烷氧基；C3-6烯氧基；C2-6炔氧基；羟基(C1-3烷氧基)；或任选地被取代的C1-3烷基；

R1'为氢、氟或羟基；前提条件是当R1'为氟时，R1为氢或氟；R2为氢；羟基；氟；任选地被取代的C1-3烷氧基；C3-6烯氧基；C2-6炔氧基；羟基(C1-3烷氧基)；或任选地被取代的C1-3烷基；并且R3为氢；

或者，R3为-CH2-并且R2为-O-；使得R2、R3以及它们所连接的原子形成5元环；R2'为氢、氟或羟基；前提条件是当R2'为氟时，R2为氢或氟；R3为氢、氟、CH3或CH2F；X1和X2独立地为O、S或CH2；

L和L1独立地为-CH2-或-CH2CH2-；Y和Y1独立地为不存在、O或NH；Z和Z1独立地为O或NH；

M和M1中的一者为(i) 当M为(ii) 当M1为

；并且M和M1中的另一者为

或

，其中：

时，Y和Z中的一者为NH，并且Y和Z中的另一者为O；并且时，Y1和Z1中的一者为NH，并且Y1和Z1中的另一者为O；

；并且；

(iii) 当Y不存在时，L为-CH2CH2，并且M为(iv) 当Y1不存在时，L1不存在，并且M1为

R4为羟基、甲基、BH3或-SR5；其中：R5为氢、-CH2OC(O)R6、-CH2OC(O)OR6、-CH2CH2SC(O)R6或-CH2CH2S-SCH2R6；并且R6为C6-10芳基、杂芳基、杂环烷基、C3-12环烷基或任选地被取代的C1-20烷基；或者其对映体、非对映体或药学上可接受的盐形式。2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1或R2为任选地被一至七个卤素、甲氧基或任选地被取代的C6-10芳基取代的C1-3烷氧基。

3.根据权利要求2所述的化合物，其中所述C6-10芳基任选地被一至二个氟、氯、溴、碘、C1-3烷氧基、C1-3烷基、羟基、硝基或氰基取代。

4.根据权利要求1所述的化合物，其中R1或R2为被一至三个氟、氯、溴、碘或羟基取代的C1-3烷基。

5.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为F。6.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为H。7.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为OH。8.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R1'为H。9.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中R1'为F。10.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2为F。

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11.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R2为H。12.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R2为OH。13.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2'为H。14.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R3为H。15.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中L为CH2。16.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中L1为CH2。17.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M为P(O)(OH)。18.根据权利要求1至16中任一项所述的化合物，其中M为P(O)(SH)。19.根据权利要求1至16中任一项所述的化合物，其中M为S(O)2。20.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M1为S(O)2。21.根据权利要求1至19中任一项所述的化合物，其中M1为P(O)(OH)。22.根据权利要求1至19中任一项所述的化合物，其中M1为P(O)(SH)。23.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中X为O。24.根据权利要求1至22中任一项所述的化合物，其中X为CH2。25.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中X1为O。26.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物，其中X1为CH2。27.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Y为O。28.根据权利要求1至26中任一项所述的化合物，其中Y为NH。29.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Y1为NH。30.根据权利要求1至28中任一项所述的化合物，其中Y1为O。31.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Z为O。32.根据权利要求1至30中任一项所述的化合物，其中Z为NH。33.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Z1为O。34.根据权利要求1至32中任一项所述的化合物，其中Z1为CH2。35.根据权利要求1至32中任一项所述的化合物，其中Z1为NH。36.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中B1和B2各自为b6：

。

37.根据权利要求1至35中任一项所述的化合物，其中B1为b7并且B2为b6

。

38.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物具有以下结构：

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。

39.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为：

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或其药学上可接受的盐形式。40.一种化合物，所述化合物为：

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或其药学上可接受的盐形式。

41.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物为：

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或其药学上可接受的盐。

42.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物为：

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或其药学上可接受的盐。

43.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物为：

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或其药学上可接受的盐。

44.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物为：

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或其药学上可接受的盐。

45.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物为：

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或其药学上可接受的盐。46.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据前述权利要求中任一项所述的化合物，以及药学上可接受的载体、药学上可接受的赋形剂和药学上可接受的稀释剂中的至少一种。

47.根据权利要求46所述的药物组合物，其中所述组合物为固体口服剂型。48.根据权利要求46所述的药物组合物，其中所述组合物为糖浆、酏剂或悬浮液。49.一种治疗由STING调制的疾病、综合征或病症的方法，所述方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至45中任一项所述的化合物。

50.一种治疗疾病、综合征或病症的方法，其中所述疾病、综合征或病症受STING激动的影响，所述方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至45中任一项所述的化合物。

51.根据权利要求50所述的方法，其中所述疾病、综合征或病症为癌症。

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52.根据权利要求50或51所述的方法，其中所述癌症为黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌或纤维肉瘤。

53.根据权利要求50所述的方法，其中所述疾病、综合征或病症为病毒感染。54.根据权利要求50所述的方法，其中所述病毒感染为乙型肝炎。55.一种治疗疾病、综合征或病症的方法，所述疾病、综合征或病症为病毒感染、黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌或纤维肉瘤，所述方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求46至48中任一项所述的组合物。

56.根据权利要求55所述的方法，其中所述病毒感染为乙型肝炎。

57.根据权利要求1至45中任一项所述的化合物或根据权利要求46至48中任一项所述的组合物，所述化合物或所述组合物用于治疗疾病、综合征或病症，其中所述疾病、综合征或病症受STING激动的影响。

58.根据权利要求1至45中任一项所述的化合物或根据权利要求46至48中任一项所述的组合物，所述化合物或所述组合物用于治疗疾病、综合征或病症，所述疾病、综合征或病症为病毒感染、黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌或纤维肉瘤。

59.根据权利要求57或58所述的化合物，其中所述疾病、综合征或病症为病毒感染、黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌或纤维肉瘤。

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作为STING激动剂的环状二核苷酸

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[0001]

相关申请的交叉引用

[0002]本申请要求2018年7月17日提交的美国临时专利申请62/699,001的优先权的权益，该临时专利申请全文以引用方式并入本文并且用于所有目的。技术领域

[0003]本发明涉及新型化合物，这些新型化合物为STING(干扰素基因的刺激剂)激动剂，并可用于治疗受STING蛋白调制的影响的障碍。本发明还涉及包含此类化合物中的一种或多种的药物组合物、制备此类化合物和组合物的方法，以及此类化合物或药物组合物用于治疗各种疾病、综合征和障碍的用途。本发明可涉及下游信号传导途径的激活，进一步引起第二信使和生长因子的激活，以及涉及先天性免疫和适应性免疫的干扰素的产生。更具体地，本发明涉及此类化合物或药物组合物用于治疗各种感染、疾病、综合征和障碍的用途，该疾病、综合征和障碍包括但不限于黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和抗病毒疗法。

背景技术

[0004]STING(干扰素基因的刺激剂)也称为TMEM173、MITA、MPYS和ERIS，是位于细胞内的跨膜受体和细胞溶质核酸的关键传感器(Zhong B等人，“The Adaptor Protein MITA Links Virus-Sensing Receptors to IRF3 Transcription Factor Activation”.Immunity.2008，第29卷：538-550)。最近的研究揭示STING的生物学及其在调动先天性免疫应答中的作用，从而在小鼠模型中产生强健抗肿瘤活性。STING途径的激活引起通过IRF3(干扰素调节因子3)途径诱导的I型干扰素(主要为IFN-α和IFN-β)的产生。IRF3的激活被认

为是由TBK1介导的，该TBK1招募并磷酸化IRF3，从而形成一种能够进入细胞核以转录I型干扰素和其它基因的IRF3同型二聚体(Liu等人，“Phosphorylation of innate immune adaptor proteins MAVS,STING,and TRIF induces IRF3 activation”Science.2015:2630-2637)。TBK1还激活激活的B细胞途径的核因子kappa轻链增强子，这经由致癌转录因子NF-KB引起促炎细胞因子(IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α等)的产生。此外，STING激活STAT6(信号转导子和转录激活因子6)以诱导(Th2型)、增加(IL-12)或降低(IL-10)各种细胞因子(包括趋化因子CCL2、CCL20和CCL26)的产生(Chen H等人，“Activation of STAT6 by STING Is Critical for Antiviral Innate Immunity”Cell.2011，第14卷：433-446)。据报道，在激活时Ser366上STING的直接磷酸化也通过TBK1发生(Corrales,L.等人，“Direct activation of STING in the tumor microenvironment leads to potent and systemic tumor regression and immunity”Cell Reports,2015，第11卷：1-13；Konno,H.等人，“Cyclic dinucleotides trigger ULK1(ATG1)phosphorylation of STING to prevent sustained innate immune signaling”Cell,2013，第155卷：688-698)。

[0005]已阐明结合并激活STING(2',3')环鸟苷单磷酸腺苷单磷酸(2',3'-cGAMP)的天然配体和负责其合成的酶(cGAS，也称为C6orf150或MB21D1)，提供调制该途径的机会。cGAMP

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为在哺乳动物细胞中产生的STING的高亲和力配体，其充当内源性第二信使以激活STING途径。它是一种环状二核苷酸，具有独特的2’,3’连接，由cGAS在外源双链DNA(例如由侵入细菌、病毒或原生动物释放)或哺乳动物中的自身DNA存在下产生(Wu等人，2013年；Sun,L.等人，“Cyclic GMP-AMP Synthase Is a Cytosolic DNA Sensor That Activates the Type I Interferon Pathway”Science,2013，第339卷：786-791；Bhat N和Fitzgerald KA.“Recognition of Cytosolic DNA by cGAS and other STING-dependent sensors”.Eur J Immunol.2014年3月；44(3):634-40)。STING激活也可通过由侵入细菌释放的外源(3',3)环状二核苷酸(c-di-GMP、c-di-AMP和3’3’-cGAMP)的结合而发生(Zhang X,等人，“Cyclic GMP-AMP Containing Mixed Phosphodiester Linkages Is An Endogenous High-Affinity Ligand for STING”Molecular Cell,2013，第51卷：226-235；Danilchanka,O和Mekalanos,JJ.“Cyclic Dinucleotides and the Innate Immune Response”Cell.2013，第154卷：962-970)。

[0006]STING途径的激活触发免疫应答，该免疫应答引起生成可收缩肿瘤并提供持久免疫的特异性杀灭性T细胞，使得它们不再复发。在临床前模型中用STING激动剂获得的显著抗肿瘤活性已对该靶标生成高水平的激动，并且能够调制STING途径的小分子化合物具有治疗癌症和降低自身免疫性疾病两者的潜力。[0007]STING途径的激活还有助于抗病毒应答。无论在细胞还是生物体水平上，功能性应答的丧失都表明在不存在STING的情况下无法控制病毒载量。STING途径的激活触发免疫应答，该免疫应答产生对抗病毒并调动免疫系统的先天和适应性臂的抗病毒和促炎细胞因子。最终，针对病原性病毒开发出持久免疫力。在临床前模型中用STING激动剂获得的显著抗病毒活性已对该靶标生成高水平的激动，并且可调制STING途径的小分子化合物具有治疗慢性病毒感染(诸如乙型肝炎)的潜力。

[0008]慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是重大的全球健康问题，影响着世界人口的超过5％(全世界超过3亿5千万的人口和美国125万的个体)。尽管可获得某些HBV疫苗和疗法，但是慢性HBV感染的负担因发展中国家大部分地区的次优治疗选项和持续的新感染率而仍旧为一个重大且未能应对的世界性医学问题。目前的治疗仅受限于两类试剂：充当病毒聚合酶的抑制剂的干扰素α和核苷类似物。然而，这些疗法中没有一种提供对疾病的治愈，并且耐药性、低功效和耐受性问题限制它们的影响。HBV的低治愈率至少部分归因于这样的事实：病毒产生的完全抑制难以用单一的抗病毒剂来实现。然而，HBV DNA的持久性抑制减缓了肝脏疾病的发展并且有助于预防肝细胞癌。对于HBV感染患者的当前治疗目标旨在将血清HBV DNA降至很低或不可检出的水平，并最终减少或预防硬化症和肝细胞癌的发展。因此，本领域需要可提高对病毒产生的抑制并且可治疗、改善、或预防HBV感染的治疗剂。将此类治疗剂作为单一治疗药物施用或与其它HBV治疗或辅助治疗联合施用于HBV感染的患者，可导致病毒载量显著降低、预后改善、疾病发展减慢并且血清转化率增强。[0009]增强先天性免疫和适应性免疫的潜在治疗有益效果使得STING成为有吸引力的治疗靶标，其自身表现出令人印象深刻的活性，并且也可与其它免疫疗法联合。发明内容

[0010]本发明涉及式(I)的化合物：

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[0011]

[0012]

B1和B2独立地为b1、b2、b3、b4、b5、b6、b7、b8、b9、b10、b11、b12、b13、b14、b15、b16、

b17、b18、b19、b20、b21、b22、b23、b24、b25、b26、b27、b28、b29或b30：

[0013]

[0014]

B1和B2可以相同或不同。在一些方面，B1和B2相同。在其它方面，B1和B2不同。在一些实施方案中，B1为b1。在其它实施方案中，B1为b2。在另外实施方案中，B1为b3。在其它实施方案中，B1为b4。在另外实施方案中，B1为b5。在其它实施方案中，B1为b6。在另外实施方案中，B1为b7。在其它实施方案中，B1为b8。在另外实施方案中，B1为b9。在其它实施方案中，B1为b10。在另外实施方案中，B1为b11。在其它实施方案中，B1为b12。在另外实施方案中，B1为b13。在其它实施方案中，B1为b14。在另外实施方案中，B1为b15。在其它实施方案中，B1为

[0015]

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b16。在另外实施方案中，B1为b17。在其它实施方案中，B1为b18。在另外实施方案中，B1为b19。在其它实施方案中，B1为b20。在另外实施方案中，B1为b21。在其它实施方案中，B1为b22。在另外实施方案中，B1为b23。在其它实施方案中，B1为b24。在其它实施方案中，B1为b25。在另外实施方案中，B1为b26。在其它实施方案中，B1为b27。在另外实施方案中，B1为b28。在其它实施方案中，B1为b29。在另外实施方案中，B1为b30。在其它实施方案中，B1为b6、b7、b12至b14、b17、b18、b20、b21或b26至b30。在另外实施方案中，B1为b6或b7。[0016]在一些实施方案中，B2为b1。在其它实施方案中，B2为b2。在另外实施方案中，B2为b3。在其它实施方案中，B2为b4。在另外实施方案中，B2为b5。在其它实施方案中，B2为b6。在另外实施方案中，B2为b7。在其它实施方案中，B2为b8。在另外实施方案中，B2为b9。在其它实施方案中，B2为b10。在另外实施方案中，B2为b11。在其它实施方案中，B2为b12。在另外实施方案中，B2为b13。在其它实施方案中，B2为b14。在另外实施方案中，B2为b15。在其它实施方案中，B2为b16。在另外实施方案中，B2为b17。在其它实施方案中，B2为b18。在另外实施方案中，B2为b19。在其它实施方案中，B2为b20。在另外实施方案中，B2为b21。在其它实施方案中，B2为b22。在另外实施方案中，B2为b23。在其它实施方案中，B2为b24。在其它实施方案中，B2为b25。在另外实施方案中，B2为b26。在其它实施方案中，B2为b27。在另外实施方案中，B2为b28。在其它实施方案中，B2为b29。在另外实施方案中，B2为b30。在其它实施方案中，B2为b6、b7、b12至b14、b17、b18、b20、b21或b26至b30。在另外实施方案中，B2为b6或b7。[0017]R1独立地选自氢；羟基；氟；任选独立地被一至七个卤素取代基、甲氧基或C6-10芳基取代的C1-3烷氧基；其中所述C6-10芳基任选独立地被一至二个取代基取代，该取代基独立地选自氟、氯、溴、碘、C1-3烷氧基、C1-3烷基、羟基、硝基和氰基；C3-6烯氧基；C2-6炔氧基；羟基(C1-3烷氧基)；或者任选独立地被一至三个选自氟、氯、溴、碘或羟基的取代基取代的C1-3烷基。在一些实施方案中，R1为氢。在其它实施方案中，R1为羟基。在另外实施方案中，R1为氟。在其它实施方案中，R1为任选地被一至七个卤素取代基、甲氧基或C6-10芳基取代的C1-3烷氧基。在一些方面，C6-10芳基取代基任选地被一至二个取代基取代，该取代基独立地为氟、氯、溴、碘、C1-3烷氧基、C1-3烷基、羟基、硝基或氰基。在其它实施方案中，R1为C3-6烯氧基。在另外实施方案中，R1为C2-6炔氧基。在其它实施方案中，R1为羟基(C1-3烷氧基)。在另外实施方案中，R1为任选地被一至三个取代基取代的C1-3烷基，该取代基为氟、氯、溴、碘或羟基。在其它实施方案中，R1为被苯基取代的C1-6烷氧基。在另外实施方案中，R1为OCH2-苯基。在其它实施方案中，R1为OCH2取代的苯基。在另外实施方案中，R1为被氟、氯、溴、碘、C1-3烷氧基、C1-3烷基、羟基、硝基或氰基，优选地C1-3烷氧基，更优选地甲氧基取代的OCH2-苯基。在其它实施方案中，R1为F、OH或氢。

[0018]R1'独立地选自氢、氟、羟基或C1-6烷基；前提条件是当R1'为氟时，R1为氢或氟。在一些实施方案中，R1'为氢。在其它实施方案中，R1'为氟。在另外实施方案中，R1'为羟基。在其它实施方案中，R1’为C1-6烷基，诸如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或己基。在另外实施方案中，R1’为甲基。在其它实施方案中，当R1'为氟时，R1为氢或氟。在另外实施方案中，R1’为氢、氟或甲基。

[0019]R2为氢；羟基；氟；任选独立地被一至七个卤素、甲氧基或C6-10芳基取代的C1-3烷氧基(其中所述C6-10芳基任选独立地被一至二个取代基取代，该取代基独立地为氟、氯、溴、碘、C1-3烷氧基、C1-3烷基、羟基、硝基或氰基)；C3-6烯氧基；C2-6炔氧基；羟基(C1-3烷氧基)；或

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者任选独立地被一至三个取代基取代的C1-3烷基，该取代基为氟、氯、溴、碘或羟基；并且R3为氢。在一些实施方案中，R2为H。在其它实施方案中，R2为羟基。在另外实施方案中，R2为氟。在其它实施方案中，R2为任选独立地被一至七个卤素、甲氧基或C6-10芳基取代的C1-3烷氧基。在一些方面，R2为被一至二个取代基取代的C1-3烷氧基，该取代基独立地为氟、氯、溴、碘、C1-3烷氧基、C1-3烷基、羟基、硝基或氰基。在另外实施方案中，R2为C3-6烯氧基。在其它实施方案中，R2为C2-6炔氧基。在另外实施方案中，R2为羟基(C1-3烷氧基)。在其它实施方案中，R2为C1-3烷基。在另外实施方案中，R2为独立地被一至三个取代基取代的C1-3烷基，该取代基为氟、氯、溴、碘或羟基。在其它实施方案中，R2为F、氢或羟基。在另外实施方案中，R2为F或H。在其它实施方案中，R2为H或羟基。在另外实施方案中，R2为F或羟基。[0020]另选地，R3为-CH2-或-CH2CH2-，并且R2为–O–；使得R2、R3以及它们所连接的原子形成5元环或6元环。在一些实施方案中，R3为-CH2-并且R2为–O–；使得R2、R3以及它们所连接的原子形成5元环。在其它实施方案中，R3为-CH2CH2-并且R2为–O–；使得R2、R3以及它们所连接的原子形成6元环。

[0021]R2'独立地选自氢、氟或羟基；前提条件是当R2'为氟时，R2为氢或氟。在一些实施方案中，R2'为氢。在其它实施方案中，R2'为氟。在另外实施方案中，R2'为羟基。在其它实施方案中，当R2'为氟时，R2为氢或氟。[0022]R3独立地选自氢、氟、CH3或CH2F。在一些实施方案中，R3为氢。在其它实施方案中，R3为氟。在另外实施方案中，R3为CH3。在其它实施方案中，R3为CH2F。[0023]X1和X2独立地选自O、S和CH2。在一些方面，X1和X2相同。在其它方面，X1和X2不同。在一些实施方案中，X1为O、S或CH2。在其它实施方案中，X1为O。在另外实施方案中，X1为S。在另外实施方案中，X1为CH2。在其它实施方案中，X2为O。在另外实施方案中，X2为S。在其它实施方案中，X2为CH2。在另外实施方案中，X1为O或CH2。在另外实施方案中，X2为O或CH2。[0024]L和L1独立地选自-CH2-和-CH2CH2-。在一些方面，L和L1相同。在其它方面，L和L1不同。在一些实施方案中，L为-CH2-。在其它实施方案中，L为-CH2CH2-。在另外实施方案中，L1为-CH2-。在其它实施方案中，L1为-CH2CH2-。[0025]Y和Y1各自独立地不存在或者选自O、NH或N(C1-6烷基)。Y和Y1相同或可以不同。在一些方面，Y和Y1相同。在其它方面，Y和Y1不同。在一些实施方案中，Y为O。在其它实施方案中，Y为NH。在另外实施方案中，Y1为O。在其它实施方案中，Y1为NH。在另外实施方案中，Y为N(C1-6烷基)，诸如N(CH3)。在其它实施方案中，Y1为N(C1-6烷基)，诸如N(CH3)。[0026]Z和Z1独立地选自O和NH。Z和Z1相同或可以不同。在一些方面，Z和Z1相同。在其它方面，Z和Z1不同。在一些实施方案中，Z为O。在其它实施方案中，Z为NH。在另外实施方案中，Z1为O。在其它实施方案中，Z1为NH。

[0027]

M和M1独立地为在一些实施方案中，M和M1相同。在其它实

施方案中，M和M1不同。在另外实施方案中，M为在其它实施方案中，M1为

在另外实施方案中，M为在其它实施方案中，M1为在另外实

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在其它实施方案中，M为

并且M1为

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施方案中，M和M1为在另外

实施方案中，M为并且M1为

[0028]在其它实施方案中，M和M1中的一者为并且M和M1中的另一者独立地选

自

为O；并且，使得当M1为

使得当M为时，Y和Z中的一者为NH，并且Y和Z中的另一者

时，Y1和Z1中的一者为NH，并且Y1和Z1中的另一者为O；前提

前提条件是当Y1不存在时，L1为-CH2CH2

条件是当Y不存在时，L为-CH2CH2并且M为

并且M1为

在一些方面，Z、M、Y和L基团的组合形成Z-M-Y-L部分。该Z-M-Y-L部分可为OP(O)

(OH)OCH2、OP(O)(SH)OCH2、OS(O)2NHCH2、NHS(O)2OCH2、OP(BH3)(O)OCH2。在其它实施方案中，Z-M-Y-L为OP(O)(OH)OCH2、OP(O)(SH)OCH2或NHS(O)2OCH2。在另外实施方案中，Z-M-Y-L为OP(O)(OH)OCH2。在其它实施方案中，Z-M-Y-L为OP(O)(SH)OCH2。在另外实施方案中，Z-M-Y-L为OS(O)2NHCH2。在其它实施方案中，Z-M-Y--L为NHS(O)2OCH2。在另外实施方案中，Z-M-Y-L为OP(BH3)(O)OCH2。

[0030]在其它方面，L1、Y1、M1和Z1基团的组合形成L1-Y1-M1-Z1部分。该L1-Y1-M1-Z1部分可为CH2NHS(O)2O、CH2OP(O)(OH)O、CH2CH2OP(O)(OH)O、CH2OP(O)(SH)O、CH2OS(O)2NH、CH2N(CH3)S(O)2O或CH2CH2OP(O)(SH)O。在一些实施方案中，L1-Y1-M1-Z1为CH2NHS(O)2O。在其它实施方案中，L1-Y1-M1-Z1为CH2OP(O)(OH)O。在另外实施方案中，L1-Y1-M1-Z1为CH2CH2OP(O)(OH)O。在其它实施方案中，L1-Y1-M1-Z1为CH2OP(O)(SH)O。在另外实施方案中，L1-Y1-M1-Z1为CH2OS(O)

在其它实施方案中，L1-Y1-M1-Z1为CH2N(CH3)S(O)2O。在另外实施方案中，L1-Y1-M1-Z1为2NH。

CH2CH2OP(O)(SH)O。

[0031]R4独立地选自羟基、甲基、BH3和-SR5；其中R5独立地选自氢、-CH2OC(O)R6、-CH2OC(O)OR6、-CH2CH2SC(O)R6和-CH2CH2S-SCH2R6。在一些实施方案中，R4为羟基。在其它实施方案中，R4为甲基。在另外实施方案中，R4为BH3。在其它实施方案中，R4为-SR5。在一些方面，R5为氢。在其它方面，R5为-CH2OC(O)R6。在另外方面，R5为-CH2OC(O)OR6。在其它方面，R5为-CH2CH2SC(O)R6。在另外方面，R5为-CH2CH2S-SCH2R6。[0032]R6独立地选自C6-10芳基、杂芳基、杂环烷基、C3-12环烷基、以及任选独立地被一至五个氟或羟基取代基、C1-6烷基、C6-10芳基或C3-12环烷基取代的C1-20烷基。在一些实施方案中，R6为C6-10芳基。在其它实施方案中，R6为杂芳基。在另外实施方案中，R6为杂环烷基。在其它实施方案中，R6为C3-12环烷基。在另外实施方案中，R6为任选独立地被一至五个氟或羟基取

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[0029]

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代基、C1-6烷基、C6-10芳基或C3-12环烷基取代的C1-20烷基。[0033]还设想了本文所述化合物的对映体、非对映体或药学上可接受的盐。[0034]本发明还提供了一种药物组合物，该药物组合物包含以下物质、由以下物质组成和/或基本上由以下物质组成：药学上可接受的载体、药学上可接受的赋形剂和/或药学上可接受的稀释剂以及式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物或其药学上可接受的盐形式。在一些方面，疾病或病症为乙型肝炎。

[0035]本发明还提供了用于制备药物组合物的方法，该方法包括以下步骤、由以下步骤组成和/或基本上由以下步骤组成：将式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物与药学上可接受的载体、药学上可接受的赋形剂和/或药学上可接受的稀释剂混合。在一些方面，疾病或病症为乙型肝炎。

[0036]本发明还提供了用于使用式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物治疗或改善受试者(包括哺乳动物和/或人)中的病毒感染、疾病、综合征或病症的方法，其中病毒感染、疾病、综合征或病症受STING激动的影响。

[0037]本发明还提供了用于使用式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物治疗或改善受试者(包括哺乳动物和/或人)中的病毒感染、疾病、综合征或病症的方法。

[0038]本发明还提供了用于使用式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物治疗或改善受试者(包括哺乳动物和/或人)中的病毒感染、疾病、综合征或病症的方法，其中病毒感染、疾病、综合征或病症受STING激动的影响，选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。在一些方面，疾病或病症为乙型肝炎。

[0039]本发明还提供了用于使用式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物治疗或改善受试者(包括哺乳动物和/或人)中的病毒感染、疾病、综合征或病症的方法，该病毒感染、疾病、综合征或病症选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。在一些方面，疾病或病症为乙型肝炎。

[0040]本发明还涉及本文所述化合物中的任一种在制备药物中的用途，其中该药物经制备用于治疗对其有需要的受试者中的病毒感染、疾病、综合征或病症，该病毒感染、疾病、综合征或病症受STING激动的影响，选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。在一些方面，疾病或病症为乙型肝炎。

[0041]本发明还涉及本文所述化合物中的任一种在制备药物中的用途，其中该药物经制备用于治疗对其有需要的受试者中的病毒感染、疾病、综合征或病症，该病毒感染、疾病、综合征或病症选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。在一些方面，疾病或病症为乙型肝炎。

[0042]本发明还涉及充当STING选择性激动剂的取代的环状二核苷酸衍生物的制备。[0043]举例说明，本发明为治疗病毒感染、疾病、综合征或病症的方法，该病毒感染、疾病、综合征或病症由STING调制，选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎，该方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的上述化合物或药物组合物中的任一种。在一些方面，疾病或病症为乙型肝炎。[0044]举例说明，本发明为治疗病毒感染、疾病、综合征或病症的方法，该病毒感染、疾病、综合征或病症选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎，该方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的上述化合物或药物组合物中的任一种。在

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一些方面，疾病或病症为乙型肝炎。[0045]在另一个实施方案中，本发明涉及一种用于治疗病毒感染、疾病、综合征或病症的式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物，该病毒感染、疾病、综合征或病症受STING激动的影响，选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。在一些方面，疾病或病症为乙型肝炎。

[0046]在另一个实施方案中，本发明涉及一种组合物，该组合物包含用于治疗病毒感染、疾病、综合征或病症的式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物，该病毒感染、疾病、综合征或病症选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。在一些方面，疾病或病症为乙型肝炎。

具体实施方式

[0047]关于取代基，术语“独立地”是指当可能存在多于一个的取代基时，所述取代基可彼此相同或不同的情况。[0048]术语“烷基”无论是单独使用或作为取代基的部分使用，均是指具有1至约20个碳原子的直链或支链的碳链。因此，碳原子的指定数目(例如C1-20)独立地指烷基部分中的碳原子数目或指较大的含烷基取代基的烷基部分中的碳原子数目。在一些实施方案中，烷基为C1-20烷基。在另外实施方案中，烷基为C1-8烷基。在其它实施方案中，烷基为C1-6烷基。在另外实施方案中，烷基为C1-3烷基。在其它实施方案中，烷基为甲基。在具有多个烷基基团的取代基诸如(C1-6烷基)2氨基-中，该二烷基氨基的C1-6烷基基团可相同或不同。[0049]术语“烷氧基”是指-O-烷基基团，其中术语“烷基”如上文所定义。在一些实施方案中，烷氧基为C1-6烷氧基。在另外实施方案中，烷氧基为C1-3烷氧基。在另外实施方案中，烷氧基为C1-6烷氧基。在其它实施方案中，烷氧基为甲氧基。[0050]术语“烯基”和“炔基”是指具有2至约8个碳原子的直链和支链的碳链，其中烯基链含有至少一个双键并且炔基链含有至少一个三键。在一些实施方案中，烯基为C2-6烯基。在另外实施方案中，烯基为C2-6烯基。在一些实施方案中，炔基为C2-6炔基。在另外实施方案中，炔基为C2-4炔基。[0051]术语“烯氧基”和“炔氧基”是指O-烯基和O-炔基基团，其中烯基和炔基如本文所定义。在一些实施方案中，烯氧基为O-C2-6烯基。在另外实施方案中，烯氧基为O-C3-6烯基。在一些实施方案中，炔氧基为O-C2-6炔基。在另外实施方案中，炔氧基为C3-6炔基。[0052]术语“羟基(C1-3烷氧基)”是指如本文所定义的C1-3烷氧基基团，其中烷氧基部分的至少一个碳原子被至少OH基团取代。在一些实施方案中，C1-3烷氧基基团被一个OH基团取代。

[0053]术语“环烷基”是指具有3至约14个碳原子的饱和或部分饱和的单环的或多环的烃环。此类环的示例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和金刚烷基。在一些实施方案中，环烷基为C3-12烷基。在其它实施方案中，环烷基为C3-8烷基。在另外实施方案中，环烷基为C3-6烷基。在其它实施方案中，环烷基为环丙基、环丁基或环戊基。[0054]术语“杂环基”和“杂环烷基”可互换，并且是指具有3至约10个环成员的非芳族单环环系或二环环系，该环成员包含至少1个碳原子和1至4个杂原子，该杂原子独立地选自N、O和S。具有约5至约7个成员的非芳族环状环(其中1至2个成员为N)、或具有5至7个成员的非

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芳族环状环(其中0、1或2个成员为N，并且至多2个成员为O或S，并且至少一个成员必须为N、O或S)包括在术语杂环基内；其中任选地，所述环含有0至1个不饱和键，并且任选地，当所述环具有6或7个成员时，其含有至多2个不饱和键。形成杂环的碳原子环成员可以是完全饱和的或部分饱和的。[0055]术语“杂环基”也包括桥接形成二环的两个5元单环杂环烷基基团。此类基团不视为是完全芳族的，并且不称它们为杂芳基基团。当杂环是二环时，杂环的两个环是非芳族的并且环中的至少一个环含有杂原子环成员。[0056]杂环基基团的示例包括且不限于吡咯啉基(包括2H-吡咯、2-吡咯啉基或3-吡咯啉基)、吡咯烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基和哌嗪基。除非另外指明，否则杂环在可得到稳定结构的任何杂原子或碳原子上与其侧基连接。[0057]术语“芳基”是指具有约6至约10个碳成员的不饱和芳族单环或二环碳环。在一些实施方案中，芳基为C6-10芳基。在另外实施方案中，芳基为C6-8芳基。芳环的示例包括苯基和萘基。在一些实施方案中，芳基为苯基。[0058]术语“杂芳基”是指具有约5至约10个环成员的芳族单环环系或二环环系，该环成员含有碳原子和1至4个杂原子，该杂原子独立地选自N、O和S。具有5或6个成员的芳族环(其中环由碳原子组成并具有至少一个杂原子成员)包括在术语杂芳基内。合适的杂原子包括氮、氧和硫。在5元环的情况下，杂芳基环优选地含有氮、氧或硫中的一个成员，此外还含有至多3个附加的氮。在6元环的情况下，杂芳基环优选含有1至3个氮原子。对于其中6元环具有3个氮原子的情况，最多2个氮原子是相邻的。杂芳基基团的示例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、喹啉基、异喹啉基和喹唑啉基。除非另外指明，否则杂芳基在导致稳定结构的任何杂原子或碳原子上与其侧基连接。[0059]术语“卤素”或“卤”是指氟、氯、溴和碘原子。在一些实施方案中，卤素为氟。在其它实施方案中，卤素为氯。在另外实施方案中，卤素为溴。在其它实施方案中，卤素为碘。[0060]当术语“烷基”或“芳基”或其前缀词根的任一者出现于取代基(例如，芳基烷基、烷基氨基)的名称中时，该名称应解释为包括上述对“烷基”和“芳基”给予的那些限制。碳原子的指定数目(例如C1-C6)独立地指烷基部分、芳基部分中或其中烷基以其前缀词根出现的较大取代基的烷基部分中的碳原子数目。对于烷基和烷氧基取代基，碳原子的指定数目包括所规定的给定范围内的所有独立成员。例如，C1-6烷基将单独地包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基，以及它们的子组合(例如，C1-2、C1-3、C1-4、C1-5、C2-6、C3-6、C4-6、C5-6、C2-5等)。[0061]一般来讲，在本公开全部内容中使用的标准命名法下，指定侧链的终端部分首先描述，随后是朝向连接点的邻接官能团。因此，举例而言，“C1-C6烷基羰基”取代基是指下式表示的基团：

[0062]

在立构中心处的术语“R”指明立构中心仅具有R-构型，如本领域中所定义；同样，术语“S”意指立构中心仅具有S-构型。如本文所用，在立构中心处的术语“*R”或“*S”用于指

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明立构中心具有纯的但未知的构型。如本文所用，术语“RS”是指以R-和S-构型的混合物存在的立构中心。类似地，术语“*RS”或“*SR”是指以R-和S-构型的混合物存在并且相对于分子内其它立构中心为未知构型的立构中心。

[0063]未划有立体键标号的含有一个立构中心的化合物是两种对映体的混合物。含有两个未划有立体键标号的立构中心的化合物为四种非对映体的混合物。具有均标记“RS”且划有立体键标号的两个立构中心的化合物为具有如所划的相对立体化学性的二-成分混合物。具有均标记“*RS”且划有立体键标号的两个立构中心的化合物为具有未知的相对立体化学性的二-成分混合物。未划有立体键标号的未标记立构中心为R-构型和S-构型的混合物。对于划有立体键标号的未标记立构中心，绝对立体化学性是如所叙述的。[0064]除非另外指明，否则认为分子中特定位置处的任何取代基或变量的定义独立于其在该分子中其它位置处的定义。应当了解，本发明化合物上的取代基和取代模式可由本领域的普通技术人员选择，以提供化学上稳定且可通过本领域已知技术及本文所示的那些方法容易合成的化合物。[0065]术语“受试者”是指已经是治疗、观察或实验的对象的动物，优选指哺乳动物，最优选指人。[0066]术语“治疗有效量”指包括本发明化合物在内的活性化合物或药剂的量，该量可引起研究者、兽医、医生或其它医疗人员所追求的组织系统、动物或人的生物学或医学响应，这包括减轻或部分减轻受治疗的疾病、综合征、病症或障碍的症状。[0067]术语“组合物”指包括治疗有效量的规定成分的产品，以及直接或间接地由规定量的规定成分的组合产生的任何产品。[0068]术语“STING激动剂”旨在涵盖通过与STING结合并诱导下游信号转导而与STING相互作用的化合物，其特征在于与STING功能相关联的分子的激活。这包括STING、IRF3和/或NF-KB的直接磷酸化，并且还可包括STAT6。STING途径激活引起I型干扰素(主要为IFN-α和IFN-β)的产生和干扰素刺激基因的表达的增加(Chen H等人，“Activation of STAT6 by STING Is Critical for Antiviral Innate Immunity”.Cell.2011，第14卷：433-446；以及Liu S-Y等人，“Systematic identification of type I and type II interferon-induced antiviral factors”.Proc.Natl.Acad.Sci.2012：第109卷，4239-4244)。[0069]术语“STING调制的”用于指直接或经由STING途径受STING的影响的病症，包括但不限于病毒感染、疾病或病症，诸如黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎感染。在一些实施方案中，STING调制的病症是病毒感染。在其它实施方案中，STING调制的病症是黑素瘤。在另外实施方案中，STING调制的病症是结肠癌。在其它实施方案中，STING调制的病症是结肠癌。在另外实施方案中，STING调制的病症是乳腺癌。在其它实施方案中，STING调制的病症是前列腺癌。在另外实施方案中，STING调制的病症是肺癌。在其它实施方案中，STING调制的病症是纤维肉瘤。在另外实施方案中，STING调制的病症是乙型肝炎。

[0070]如本文所用，除非另有说明，否则术语“由STING调制的障碍”应意指任何病毒感染、疾病、障碍或病症，其特征在于用STING激动剂治疗后其特征性症状中的至少一种得到缓解或消除。合适的示例包括但不限于黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。

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CN 112424212 A[0071]

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如本文所用，除非另有说明，否则术语“影响”或“受影响的”(当涉及受STING激动

的影响的病毒感染、疾病、综合征、病症或障碍时)包括所述病毒感染、疾病、综合征、病症或障碍的一种或多种症状或临床表现的频率和/或严重性的降低；并且/或者包括防止所述病毒感染、疾病、综合征、病症或障碍的一种或多种症状或临床表现的发展或者所述病毒感染、疾病、病症、综合征或障碍的发展。

[0072]本发明的化合物在用于治疗或改善受STING激动的影响的病毒感染、疾病、综合征、病症或障碍的方法中为有用的。此类方法包括以下步骤、由以下步骤组成和/或基本上由以下步骤组成：向受试者施用治疗有效量的式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物或者其对映体、非对映体、溶剂化物或药学上可接受的盐，该受试者包括需要此类治疗、改善和/或预防的动物、哺乳动物和人。[0073]具体地，式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物或者其对映体、非对映体、溶剂化物或药学上可接受的盐形式可用于治疗或改善疾病、综合征、病症或障碍，诸如黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。[0074]更具体地，式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物或者其对映体、非对映体、溶剂化物或药学上可接受的盐形式可用于治疗或改善黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎，包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的如本文所定义的式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物或者其对映体、非对映体、溶剂化物或药学上可接受的盐形式。[0075]本文所公开的一些实施方案涉及改善和/或治疗病毒感染的方法，该病毒感染包括由嗜肝病毒(Hepadnaviridae)(诸如乙型肝炎病毒或HBV)引起的感染。该方法可包括向被鉴定为患有病毒感染的受试者施用有效量的式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式，或者包含式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式的药物组合物。

[0076]本文所公开的其它实施方案涉及一种改善和/或治疗病毒感染的方法，该方法可包括将感染病毒的细胞与有效量的本文所述的一种或多种化合物(例如，式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物或其药学上可接受的盐形式)，或者包含本文所述的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。本文所述的其它实施方案涉及在制造用于改善和/或治疗病毒感染的药物中使用式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式。

[0077]本文所述的其它实施方案涉及可用于改善和/或治疗病毒感染的式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式，或者包含式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式的药物组合物。本文所公开的一些实施方案涉及一种抑制病毒复制的方法，该方法可包括将感染病毒的细胞与有效量的式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式，或者包含本文所述的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式的药物组合物接触。

[0078]本文所述的其它实施方案涉及在制造用于抑制病毒复制的药物中使用式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式。本文所述的其它实施方案涉及可用于抑制病毒复制的本文所述的一种或多种化合物(例如，式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物或其药学上可接受的盐形式)，或者包含本文所述的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式的药物组合物。

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CN 112424212 A[0079]

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在一些实施方案中，病毒感染可为乙型肝炎病毒感染。该方法可包括向被鉴定为

患有HBV的受试者施用有效量的式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式，或者包含式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式的药物组合物。

[0080]本文所公开的其它实施方案涉及一种改善和/或治疗病毒感染的方法，该方法可包括将感染HBV病毒的细胞与有效量的式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式，或者包含式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式的药物组合物接触。本文所述的其它实施方案涉及在制造用于改善和/或治疗HBV的药物中使用式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式。

[0081]本文所述的其它实施方案涉及可用于改善和/或治疗HBV的式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式，或者包含式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式的药物组合物。本文所公开的一些实施方案涉及一种抑制HBV复制的方法，该方法可包括将感染病毒的细胞与有效量的式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式，或者包含式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。

[0082]本文所述的其它实施方案涉及在制造用于抑制HBV复制的药物中使用式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐。本文所述的其它实施方案涉及可用于抑制HBV复制的式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐，或者包含式(I)或式(Ia)至(Ir)的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式的药物组合物。

[0083]本发明的实施方案包括一种如本文所定义的式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物或者其对映体、非对映体、溶剂化物或药学上可接受的盐形式，其中选自本文所定义的变量中的一者或多者(例如，B2、X2、R2、R2'、R3、Z-M-Y-L、L1-Y1-M1-Z1、B1、X1、R1'和R1)的取代基被独立地选择为来自表1的列表中所列举的那些取代基中的任何单个取代基或取代基的任何子集。

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[0084]

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[0085]

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[0086]

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[0087]

[0088]

本发明的一个实施方案涉及一种式(Ia)的化合物：

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[0089]

其中

[0091]R1独立地选自氢；羟基；氟；任选独立地被一至七个卤素取代基、甲氧基或C6-10芳基取代的C1-3烷氧基；其中所述C6-10芳基任选独立地被一至二个取代基取代，该取代基独立地选自氟、氯、溴、碘、C1-3烷氧基、C1-3烷基、羟基、硝基和氰基；C3-6烯氧基；C2-6炔氧基；羟基(C1-3烷氧基)；或者任选独立地被一至三个选自氟、氯、溴、碘或羟基的取代基取代的C1-3烷基；

[0092]R1'独立地选自氢、氟或羟基；前提条件是当R1'为氟时，R1为氢或氟；[0093]R2独立地选自氢；羟基；氟；任选独立地被一至七个卤素取代基、甲氧基或C6-10芳基取代的C1-3烷氧基；其中所述C6-10芳基任选独立地被一至二个取代基取代，该取代基独立地选自氟、氯、溴、碘、C1-3烷氧基、C1-3烷基、羟基、硝基和氰基；C3-6烯氧基；C2-6炔氧基；羟基(C1-3烷氧基)；或者任选独立地被一至三个选自氟、氯、溴、碘或羟基的取代基取代的C1-3烷基；并且R3为氢；[0094]或者，R3为-CH2-并且R2为–O–；使得R2、R3以及它们所连接的原子形成5元环；[0095]R2'独立地选自氢、氟或羟基；前提条件是当R2'为氟时，R2为氢或氟；[0096]R3独立地选自氢、氟、CH3或CH2F；[0097]X1和X2独立地选自O、S和CH2；

[0098]L和L1独立地选自-CH2-和-CH2CH2-；

[0099]Y和Y1各自独立地不存在或者选自O和NH；[0100]Z和Z1独立地选自O和NH；

[0101]

[0090]

M和M1中的一者为并且M和M1中的另一者独立地选自

[0102]使得当M为并且，使得当M1为

时，Y和Z中的一者为NH，并且Y和Z中的另一者为O；

时，Y1和Z1中的一者为NH，并且Y1和Z1中的另一者为O；

[0103]

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CN 112424212 A[0104]

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前提条件是当Y不存在时，L为-CH2CH2并且M为

[0105][0106]

前提条件是当Y1不存在时，L1不存在并且M1为

R4独立地选自羟基、甲基、BH3和-SR5；其中R5独立地选自氢、-CH2OC(O)R6、-CH2OC

(O)OR6、-CH2CH2SC(O)R6和-CH2CH2S-SCH2R6；[0107]R6独立地选自C6-10芳基、杂芳基、杂环烷基、C3-12环烷基、以及任选独立地被一至五个氟或羟基取代基、C1-6烷基、C6-10芳基或C3-12环烷基取代的C1-20烷基；[0108]或者其对映体、非对映体或药学上可接受的盐形式。[0109]本发明的另一个实施方案涉及一种式(Ib)的化合物：

[0110]

其中

[0112]R1独立地选自氢；羟基；氟；任选独立地被一至七个卤素取代基、甲氧基或C6-10芳基取代的C1-3烷氧基；其中所述C6-10芳基任选独立地被一至二个取代基取代，该取代基独立地选自氟、氯、溴、碘、C1-3烷氧基、C1-3烷基、羟基、硝基和氰基；C3-6烯氧基；C2-6炔氧基；羟基(C1-3烷氧基)；或者任选独立地被一至三个选自氟、氯、溴、碘或羟基的取代基取代的C1-3烷基；

[0113]R1'独立地选自氢、氟或羟基；前提条件是当R1'为氟时，R1为氢或氟；[0114]R2独立地选自氢；羟基；氟；任选独立地被一至七个卤素取代基、甲氧基或C6-10芳基取代的C1-3烷氧基；其中所述C6-10芳基任选独立地被一至二个取代基取代，该取代基独立地选自氟、氯、溴、碘、C1-3烷氧基、C1-3烷基、羟基、硝基和氰基；C3-6烯氧基；C2-6炔氧基；羟基(C1-3烷氧基)；或者任选独立地被一至三个选自氟、氯、溴、碘或羟基的取代基取代的C1-3烷基；并且R3为氢；[0115]或者，R3为-CH2-并且R2为–O–；使得R2、R3以及它们所连接的原子形成5元环；[0116]R2'独立地选自氢、氟或羟基；前提条件是当R2'为氟时，R2为氢或氟；[0117]R3独立地选自氢、氟、CH3或CH2F；[0118]X1和X2独立地选自O、S和CH2；

[0119]L和L1独立地选自-CH2-和-CH2CH2-；

[0120]Y和Y1各自独立地不存在或者选自O和NH；

[0111]

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CN 112424212 A[0121][0122]

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Z和Z1独立地选自O和NH；M和M1中的一者为

并且M和M1中的另一者独立地选自

[0123]使得当M为并且，使得当M1为

时，Y和Z中的一者为NH，并且Y和Z中的另一者为O；

时，Y1和Z1中的一者为NH，并且Y1和Z1中的另一者为O；

[0124]

[0125]前提条件是当Y不存在时，L为-CH2CH2并且M为

[0126][0127]

前提条件是当Y1不存在时，L1不存在并且M1为

R4独立地选自羟基、甲基、BH3和-SR5；其中R5独立地选自氢、-CH2OC(O)R6、-CH2OC

(O)OR6、-CH2CH2SC(O)R6和-CH2CH2S-SCH2R6；[0128]R6独立地选自C6-10芳基、杂芳基、杂环烷基、C3-12环烷基、以及任选独立地被一至五个氟或羟基取代基、C1-6烷基、C6-10芳基或C3-12环烷基取代的C1-20烷基；[0129]或者其对映体、非对映体或药学上可接受的盐形式。[0130]在另外实施方案中，化合物具有式(Ic)，其中R1、R2、L、L1、Y、Y1、M、M1和B1如本文所定义。

[0131]

[0132]

在其它实施方案中，化合物具有式(Id)，其中R1、R2、L、L1、Y、Y1、M、M1、Z和Z1如本文

所定义。

[0133]

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在另外实施方案中，化合物具有式(Ie)，其中R1、R2、L、L1、Y、Y1、M、M1、Z和Z1如本文

所定义。

[0135]

[0136]

在其它实施方案中，化合物具有式(If)，其中R1、R2、L、L1、Y、Y1、M、M1、Z和Z1如本文

所定义。

[0137]

[0138]

在另外实施方案中，化合物具有式(Ig)，其中R1和R2如本文所定义。在一些方面，R1

和R2为F。在其它方面，R1为F并且R2为H。在另外方面，R1和R2为H。在其它方面，R1为H并且R2为F。

[0139]

[0140]

在其它实施方案中，化合物具有式(Ih)，其中R1和R2如本文所定义。在一些方面，R1

和R2为F。在其它方面，R1为F并且R2为H。在另外方面，R1和R2为H。在其它方面，R1为H并且R2为F。

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[0141]

[0142]

在另外实施方案中，化合物具有式(Ij)，其中R1和R2如本文所定义。在一些方面，R1

和R2为F。在其它方面，R1为F并且R2为H。在另外方面，R1和R2为H。在其它方面，R1为H并且R2为F。

[0143]

[0144]

在其它实施方案中，化合物具有式(Ik)，其中R1和R2如本文所定义。在一些方面，R1

和R2为F。在其它方面，R1为F并且R2为H。在另外方面，R1和R2为H。在其它方面，R1为H并且R2为F。

[0145]

[0146]

在另外实施方案中，化合物具有式(Im)，其中R1和R2如本文所定义。在一些方面，R1

和R2为F。在其它方面，R1为F并且R2为H。在另外方面，R1和R2为H。在其它方面，R1为H并且R2为F。

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[0147]

[0148]

在其它实施方案中，化合物具有式(In)，其中R1和R2如本文所定义。在一些方面，R1

和R2为F。在其它方面，R1为F并且R2为H。在另外方面，R1和R2为H。在其它方面，R1为H并且R2为F。

[0149]

[0150]

在另外实施方案中，化合物具有式(Ip)，其中R1和R2如本文所定义。在一些方面，R1

和R2为F。在其它方面，R1为F并且R2为H。在另外方面，R1和R2为H。在其它方面，R1为H并且R2为F。

[0151]

[0152]

在其它实施方案中，化合物具有式(Iq)，其中R1和R2如本文所定义。在一些方面，R1

和R2为F。在其它方面，R1为F并且R2为H。在另外方面，R1和R2为H。在其它方面，R1为H并且R2为F。

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[0153]

在另外方面，化合物具有式(Ir)，其中R1和R2如本文所定义。在一些实施方案中，Z-M-Y-L为OP(O)(OH)OCH2并且L1-Y1-M1-Z1-R2为CH2NHS(O)2O。在其它实施方案中，Z-M-Y-L为

CH2NHS(O)2O并且L1-Y1-M1-Z1-为OP(O)(OH)OCH2。在另外实施方案中，Z-M-Y-L为OS(O)2NHCH2并且L1-Y1-M1-Z1-为CH2OP(O)(SH)O。在其它实施方案中，Z-M-Y-L为NHS(O)2OCH2并且L1-Y1-M1-Z1-为CH2OP(O)(OH)O。在其它实施方案中，Z-M-Y-L为OS(O)2NHCH2并且L1-Y1-M1-Z1-为CH2OP(O)(OH)O。在另外实施方案中，Z-M-Y-L为NHS(O)2OCH2并且L1-Y1-M1-Z1-为CH2OP(O)(SH)O。在一些方面，R1和R2为F。在其它方面，R1为H并且R2为F。在另外方面，R1为F并且R2为H。

[0154]

[0155]

本发明的另一个实施方案涉及一种式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物，其选自本文所讨论的单个化合物中的一种或多种。[0157]对于在医学上的使用，式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物的盐是指无毒性的“药学上可接受的盐”。然而，其它盐也可用于制备式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物或其药学上可接受的盐形式。式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物的合适的药学上可接受的盐包括酸加成盐，该酸加成盐可例如通过将该化合物的溶液与药学上可接受的酸(诸如盐酸、硫酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸)的溶液混合而形成。此外，如果式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物含有酸性部分，则其合适的药学上可接受的盐可包括：碱金属盐，诸如钠盐或钾盐；碱土金属盐，诸如钙盐或镁盐；以及与合适的有机配体形成的盐，诸如季铵盐。因此，代表性药学上可接受的盐包括醋酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、依地酸钙盐、右旋樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、克拉维酸盐、柠檬酸盐、二盐酸盐、依地酸盐、乙二磺酸盐、丙酸酯十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、对α-羟乙酰氨基苯砷酸盐、己基间苯二酚盐、海巴明、氢溴酸盐、盐酸盐、羟萘酸盐、碘化物、异硫代硫酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘液酸

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[0156]

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盐、萘磺酸盐、硝酸盐、N-甲基葡糖胺铵盐、油酸盐、双羟萘酸盐(扑酸盐)、棕榈酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、硫酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐、甲苯磺酸盐、三乙基碘化物和戊酸盐。[0158]可用于制备药学上可接受的盐的代表性酸和碱包括：酸，包括乙酸、2,2-二氯乙酸、乙酰化的氨基酸、己二酸、藻酸、抗坏血酸、L-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、(+)-樟脑酸、樟脑磺酸、(+)-(1S)-樟脑-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基-乙磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、D-葡糖酸、D-葡萄糖醛酸、L-谷氨酸、α-氧代-戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、(+)-L-乳酸、(±)-DL-乳酸、乳糖酸、马来酸、(-)-L-苹果酸、丙二酸、(±)-DL-扁桃酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、扑酸、磷酸、L-焦谷氨酸、水杨酸、4-氨基-水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、鞣酸、(+)-L-酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸和十一碳烯酸；以及碱，包括氨、L-精氨酸、苯乙苄胺、苄星、氢氧化钙、胆碱、丹醇、二乙醇胺、二乙胺、2(二乙基氨基)-乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-甲基-葡糖胺、海巴明、1H-咪唑、L-赖氨酸、氢氧化镁、4-(2-羟乙基)-吗啉、哌嗪、氢氧化钾、1-(2-羟乙基)-吡咯烷、氢氧化钠、三乙醇胺、氨基丁三醇和氢氧化锌。[0159]本发明的实施方案包括式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物的前药。一般来讲，这种前药会是化合物的官能衍生物，其在体内可容易地转化成所需的化合物。因此，在本发明的治疗或预防实施方案的方法中，术语“施用”涵盖了用具体公开的化合物或未具体公开的化合物治疗或预防所述的各种疾病、病症、综合征和障碍，但所述未具体公开的化合物在施用至患者后会于体内转化成指定化合物。例如，在“Design of Prodrugs”，H.Bundgaard编辑，Elsevier，1985年中描述了用于选择和制备适宜的前药衍生物的常规工序。[0160]根据本发明实施方案的化合物具有至少一个手性中心时，它们可相应地作为对映体存在。如果化合物具有两个或更多个手性中心，则它们另外可以非对映体形式存在。应当理解，所有的此类异构体及其混合物涵盖在本发明的范围内。此外，化合物的某些结晶形式可作为多晶型物存在，并因此也旨在包括在本发明内。此外，某些化合物可与水形成溶剂化物(即水合物)或与普通有机溶剂形成溶剂化物，并且这类溶剂化物也旨在涵盖于本发明的范围内。技术人员将理解，如本文所用的术语化合物旨在包括式(I)或式(Ia)至(Ir)的溶剂化化合物。

[0161]当用于制备根据本发明某些实施方案的化合物的方法产生立体异构体的混合物时，这些异构体可通过常规技术如制备性色谱法分离。所述化合物可以外消旋形式制备，或者可通过对映体特异性合成或通过拆分来制备单独的对映体。例如，可通过标准技术，如通过与光学活性酸(诸如(-)-二对甲苯酰-d-酒石酸和/或(+)-二对甲苯酰-l-酒石酸)形成盐来形成非对映体对，然后分级结晶并再生游离碱，来将化合物拆分成它们的组分对映体。所述化合物也可通过形成非对映体酯或酰胺，然后进行色谱分离并除去手性助剂来拆分。另选地，可使用手性HPLC柱拆分所述化合物。

[0162]本发明的一个实施方案涉及一种组合物，包括药物组合物，其包含式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物的(+)-对映体、由其组成和/或基本上由其组成，其中所述组合物基本上不含所述化合物的(-)-异构体。在本发明的上下文中，基本上不含意指少于约25％，优选少于约10％，更优选少于约5％，甚至更优选少于约2％，并且甚至更优选少于约1％的(-)-异构

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体，其计算方式如下：

[0163]

本发明的另一个实施方案为一种组合物，包括药物组合物，其包含式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物的(-)-对映体、由其组成和基本上由其组成，其中所述组合物基本上不含所述化合物的(+)-异构体。在本发明的上下文中，基本上不含意指少于约25％，优选少于约10％，更优选少于约5％，甚至更优选少于约2％，并且甚至更优选少于约1％的(+)-异构体，其计算方式如下：

[0165]

[0164]

在本发明的范围内，任一个或多个元素(尤其是当针对式(I)或式(Ia)至(Ir)的化

合物而提及时)意在应以其天然丰度或以其同位素富集形式包含所述元素的全部同位素或

2

同位素混合物(天然存在的或合成制备的)。例如，对氢的标引在其范围内包括1H、H(D)和3H

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(T)。相似地，对碳和氧的标引在其范围内分别包括12C、C和14C以及16O和18O。同位素可为放

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射性的或非放射性的。放射性标记的式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物可包含选自3H、C、F122123125131757677、I、I、I、I、Br、Br、Br和82Br的一种或多种放射性同位素。优选地，放射性同位

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素选自2H、H、C和18F。

[0167]在用于制备本发明多个实施方案的化合物的任何工艺过程中，可能有必要和/或期望保护所关注的任何分子上的敏感性或反应性基团。这可使用常规保护基团实现，例如在如下文献中描述的那些：Protective Groups in Organic Chemistry(第二版)，J.F.W.McOmie,Plenum Press,1973；T.W.Greene和P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,1991；和T.W.Greene和P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis(第三版)，John Wiley&Sons,1999。可使用本领域已知的方法在方便的后续阶段除去保护基团。

[0168]尽管本发明实施方案的化合物(包括它们的药学上可接受的盐和药学上可接受的溶剂化物)可单独施用，但它们一般与药学上可接受的载体、药学上可接受的赋形剂和/或药学上可接受的稀释剂(根据施用途径和标准药物或兽医实践而选择)混合施用。因此，本发明的具体实施方案涉及包含式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物以及至少一种药学上可接受的载体、药学上可接受的赋形剂和/或药学上可接受的稀释剂的药物组合物和兽医用组合物。

[0169]以举例的方式，在本发明实施方案的药物组合物中，可将式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物与任何合适的粘结剂、润滑剂、助悬剂、包衣剂、增溶剂以及它们的组合混合。[0170]视情况而定，含有本发明化合物的固体口服剂型(如片剂或胶囊剂)可一次以至少一种剂型施用。也可按持续释放制剂的方式施用化合物。

[0171]其中可施用本发明化合物的附加口服剂型包括酏剂、溶液剂、糖浆和混悬剂；每种剂型任选地含有调味剂和着色剂。[0172]另选地，式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物可通过吸入(气管内或鼻内)施用或者以栓剂或阴道栓剂形式施用，或者它们可以洗剂、溶液、霜剂、膏剂或扑粉的形式局部施用。例如，可将它们混入霜剂中，所述霜剂包含聚乙二醇或液态石蜡的水乳液、由其组成和/或基

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本上由其组成。它们也可以所述霜膏的介于约1重量％至约10重量％之间的浓度混入油膏剂中，所述油膏剂包含蜡或软石蜡基以及任何稳定剂和防腐剂(有可能需要)、由其组成和/或基本上由其组成。替代的施用手段包括通过使用皮肤贴剂或透皮贴剂来透皮施用。[0173]本发明的药物组合物(以及单独的本发明化合物)也可通过非肠道注射，例如海绵体内、静脉内、肌内、皮下、皮内或鞘内注射。在这种情况下，该组合物还将包括合适的载体、合适的赋形剂和合适的稀释剂中的至少一种。[0174]对于非肠道施用，本发明的药物组合物最好以无菌水溶液形式使用，其可含有其它物质，例如足够的盐和单糖以制备与血液等渗的溶液。[0175]对于颊面或舌下施用，本发明的药物组合物可以片剂或锭剂形式施用，所述片剂或锭剂可以常规方式配制。

[0176]以另一个示例的方式，含有式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物中的至少一种作为活性成分的药物组合物可根据常规药物混合技术，通过将化合物与药学上可接受的载体、药学上可接受的稀释剂和/或药学上可接受的赋形剂混合而制备。所述载体、赋形剂和稀释剂可采用各种各样的形式，这取决于所需施用途径(例如口服、非肠道施用等)。因此对于诸如混悬剂、糖浆、酏剂和溶液剂的液体口服制剂，合适的载体、赋形剂和稀释剂包括水、二元醇、油、醇类、调味剂、防腐剂、稳定剂、着色剂等；对于诸如散剂、胶囊剂和片剂的固体口服制剂，合适的载体、赋形剂和稀释剂包括淀粉、糖、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘结剂、崩解剂等。固体口服制剂也可任选地用诸如糖的物质包衣，或包肠溶衣，以便调节吸收和崩解的主要部位。对于非肠道施用，载体、赋形剂和稀释剂通常包括无菌水，并且可加入其它成分以增加组合物的溶解度和可保存性。注射用混悬剂或溶液剂也可使用含水载体与适当的添加剂(如增溶剂和防腐剂)一起制备。

[0177]在平均(70kg)的人的每日约1至约4次的给药方案中，治疗有效量的式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物或其药物组合物包含约0.1mg至约3000mg或者其中的任何特定量或范围，具体地约1mg至约1000mg或者其中的任何特定量或范围，或者更具体地约10mg至约500mg或者其中的任何特定量或范围的剂量范围的活性成分；但是，对于本领域的技术人员显而易见的是：式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物的治疗有效量将随着进行治疗的疾病、综合征、病症和障碍而变化。[0178]对于口服施用，药物组合物优选以含有约1.0毫克、约10毫克、约50毫克、约100毫克、约150毫克、约200毫克、约250毫克和约500毫克式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物的片剂形式提供。

[0179]本发明的一个实施方案涉及用于口服的药物组合物，其包含约25mg至约500mg量的式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物。[0180]有利的是，式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物可以单次日剂量施用，或者每日总剂量可以每日两次、三次和四次的分剂量施用。

[0181]待施用的式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物的最佳剂量可容易确定，并且将随所使用的具体化合物、施用模式、制剂强度以及疾病、综合征、病症或障碍的进程而变化。此外，与待治疗的具体受试者相关的因素(包括受试者性别、年龄、体重、饮食和施用时间)将导致需要调整剂量以实现适当的治疗水平和所需的疗效。因此，上述剂量为一般情况的示例。当然，可能会存在其中较高或较低剂量范围是有益的个别情况，并且这类情况也在本发明的

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范围内。

[0182]式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物可在上述组合物和给药方案中的任一者中施用，或者借助于本领域已确立的那些组合物和给药方案施用，只要式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物的使用是对其有需要的受试者所要求的。[0183]作为STING蛋白激动剂，式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物在用于治疗或预防受试者(包括动物、哺乳动物和人)中的病毒感染、疾病、综合征、病症或障碍的方法中为有用的，其中该病毒感染、疾病、综合征、病症或障碍受STING蛋白的调制(包括激动)的影响。此类方法包括以下步骤、由以下步骤组成和/或基本上由以下步骤组成：向受试者施用治疗有效量的式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物、盐或溶剂化物，受试者包括需要此类治疗或预防的动物、哺乳动物和人。

[0184]在一个实施方案中，本发明涉及用于治疗癌症、癌症疾病和病症或病毒感染的式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物或其药学上可接受的盐形式。

[0185]式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物或者其药学上可接受的盐或溶剂化物可具有潜在有益的抗肿瘤效果的癌症疾病和病症的示例包括但不限于肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头癌、颈癌、子宫癌、卵巢癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、食道癌、小肠癌、肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、尿道癌、前列腺癌、阴茎癌、睾丸癌、输尿管癌、膀胱癌、肾癌或肝癌；直肠癌；肛门区域癌；输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、肾盂癌、肾细胞癌；软组织肉瘤；粘液瘤；横纹肌瘤；纤维瘤；脂肪瘤；畸胎瘤；胆管癌；肝母细胞瘤；血管肉瘤；血管瘤；肝细胞瘤；纤维肉瘤；软骨肉瘤；骨髓瘤；慢性或急性白血病；淋巴细胞性淋巴瘤；原发中枢神经系统淋巴瘤；中枢神经系统肿瘤；脊柱轴肿瘤；鳞状细胞癌；滑膜肉瘤；恶性胸膜间皮瘤；脑干胶质瘤；垂体腺瘤；支气管腺瘤；软骨瘤型错构瘤(chondromatous hamartoma)；间皮瘤(inesothelioma)；霍奇金氏病或上述癌症中的一种或多种的组合。适宜地，本发明涉及一种用于治疗或减轻选自以下的癌症的严重程度的方法：脑(胶质细胞瘤)、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、小脑发育不良性节细胞瘤、威尔氏瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、头颈部、肾、肝、黑素瘤、卵巢、胰腺、腺癌、导管癌、腺鳞癌、腺泡细胞癌、胰高血糖素瘤、胰岛素瘤、前列腺、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤、甲状腺、淋巴细胞性T细胞白血病、慢性粒细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、急性粒细胞白血病、慢性中性粒细胞白血病、急性淋巴细胞性T细胞白血病、浆细胞瘤、免疫母细胞性大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞白血病、箴粒细胞白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴母细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、神经母细胞瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、外阴癌、宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食道癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌、口腔癌、GIST(胃肠道间质瘤)和睾丸癌。[0186]在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物或其药学上可接受的盐形式，其用于治疗受选自以下的STING激动的影响的障碍：黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。

[0187]本发明所公开的式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物可用于与一种或多种可用于治疗HBV感染的附加化合物组合。这些附加化合物可包括其它所公开的化合物和/或已知治疗、

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预防、或减轻HBV感染的症状或效应的化合物。此类化合物包括但不限于HBV聚合酶抑制剂、干扰素、病毒侵入抑制剂、病毒成熟抑制剂、文献描述的衣壳组装调制器、逆转录酶抑制剂、免疫调节剂、TLR-激动剂、以及具有影响HBV生命周期或影响HBV感染后果的不同或未知机制的其它试剂。

[0188]在非限制性示例中，所公开的化合物可与选自以下的一种或多种药物(或它们的盐)结合使用：

[0189]HBV逆转录酶抑制剂，以及DNA和RNA聚合酶抑制剂，包括但不限于拉米夫定(3TC、Zeffix、Heptovir、Epivir和Epivir-HBV)、恩替卡韦(Baraclude、Entavir)、阿德福韦酯(Hepsara、Preveon、双-POM PMEA)、替诺福韦地索普西富马酸盐(Viread、TDF或PMPA)；干扰素，包括但不限于干扰素α(IFN-α)、干扰素β(IFN-β)、干扰素λ(IFN-λ)、以及干扰素γ(IFN-γ)；病毒侵入抑制剂；病毒成熟抑制剂；衣壳组装调节剂，诸如但不限于BAY 41-4109；逆转录酶抑制剂；免疫调节剂，诸如TLR-激动剂；以及不同或未知机制的试剂，诸如但不限于AT-61((E)-N-(1-氯-3-氧代基-1-苯基-3-(哌啶-1-基)丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺)、AT-130((E)-N-(1-溴-1-(2-甲氧基苯基)-3-氧代基-3-(哌啶-1-基)丙-1-烯-2-基)-4-硝基苯甲酰胺)及其类似物。

[0190]在一个实施方案中，附加治疗剂是干扰素。术语“干扰素”或“IFN”指抑制病毒复制和细胞增殖以及调节免疫应答的高度同源种特异性的蛋白质家族的任何成员。例如，人干扰素被分组成三类：I类，包括干扰素α(IFN-α)、干扰素β(IFN-β)、干扰素ω(IFN-ω)，II类，包括干扰素γ(IFN-γ)，以及III类，包括干扰素λ(IFN-λ)。如本文所用，术语“干扰素”涵盖已开发并可商购获得的重组形式的干扰素。如本文所用，术语“干扰素”还涵盖亚型干扰素，诸如化学改性或成熟的干扰素。化学改性的干扰素可包括聚乙二醇化干扰素和糖基化干扰素。干扰素的示例还包括但不限于干扰素-α-2a、干扰素-α-2b、干扰素-α-n1、干扰素-β-1a、干扰素-β-1b、干扰素-λ-1、干扰素-λ-2和干扰素-λ-3。聚乙二醇化干扰素的示例包括聚乙

二醇化干扰素-α-2a和乙二醇化干扰素α-2b。

[0191]因此，在一个实施方案中，式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物可与选自以下的干扰素联合施用：干扰素α(IFN-α)、干扰素β(IFN-β)、干扰素λ(IFN-λ)和干扰素γ(IFN-γ)。在一个具体的实施方案中，干扰素为干扰素-α-2a、干扰素-α-2b或干扰素-α-n1。[0192]在另一个具体的实施方案中，干扰素-α-2a或干扰素-α-2b是聚乙二醇化的。在一个优选的实施方案中，干扰素-α-2a是聚乙二醇化干扰素-α-2a(PEGASYS)。在另一个实施方案中，附加治疗剂选自免疫调节剂或免疫刺激剂治疗剂，其包括属于干扰素类的生物制剂。[0193]此外，附加治疗剂可为破坏一种或多种其它原发性病毒蛋白或HBV复制或持久生存所需的宿主蛋白的功能的试剂。[0194]在另一个实施方案中，附加治疗剂为阻断病毒侵入或成熟或者靶定HBV聚合酶诸如核苷或核苷酸或非核苷类聚合酶抑制剂的抗病毒剂。在联合治疗的另一个实施方案中，逆转录酶抑制剂或者DNA或RNA聚合酶抑制剂为齐多夫定、地达诺新、扎西他滨、ddA、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、恩曲他滨、恩替卡韦、阿立他滨、阿替韦拉平(Atevirapine)、三氮唑核苷、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、缬更昔洛韦、替诺福韦、阿德福韦、PMPA、西多福韦、依非韦伦、奈韦拉平、地拉夫定或依曲韦林。[0195]在一个实施方案中，附加治疗剂为诱导天然限制性免疫应答的免疫调节剂，从而

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导致针对无关病毒诱导免疫应答。换句话讲，免疫调节剂可影响抗原递呈细胞的成熟、T-细胞的增殖和细胞因子释放(例如，IL-12、IL-18、IFN-α、IFN-β和IFN–γ以及TNF-α等等)。[0196]在另一个实施方案中，附加治疗剂为TLR调节剂或TLR激动剂，诸如TLR-7激动剂或TLR-9激动剂。在联合治疗的另一个实施方案中，TLR-7激动剂选自SM360320(9-苄基-8-羟基-2-(2-甲氧基-乙氧基)腺嘌呤)和AZD 8848([3-({[3-(6-氨基-2-丁氧基-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)丙基][3-(4-吗啉基)丙基]氨基}甲基)苯基]乙酸甲酯)。[0197]在本文提供的方法中的任一种中，该方法还可包括向个体施用至少一种HBV疫苗、核苷HBV抑制剂、干扰素或它们的任何组合。在一个实施方案中，HBV疫苗选自RECOMBIVAX HB、ENGERIX-B、ELOVAC B、GENEVAC-B、或SHANVAC B中的至少一种。[0198]在一个实施方案中，本文所述的方法还包括施用至少一种选自以下的附加治疗剂：核苷酸/核苷类似物、侵入抑制剂、融合抑制剂、以及这些或其它抗病毒机制的任何组合。

[0199]在另一方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中治疗HBV感染的方法，该方法包括通过如下方式降低HBV病毒载量：向个体单独施用治疗有效量的所公开化合物或与逆转录酶抑制剂联合施用；并且还向个体施用治疗有效量的HBV疫苗。逆转录酶抑制剂可为以下中的至少一种：齐多夫定、地达诺新、扎西他滨、ddA、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、恩曲他滨、恩替卡韦、阿立他滨、阿替韦拉平(Atevirapine)、三氮唑核苷、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、缬更昔洛韦、替诺福韦、阿德福韦、PMPA、西多福韦、依非韦伦、奈韦拉平、地拉夫定或依曲韦林。[0200]在另一方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中治疗HBV感染的方法，该方法包括通过如下方式降低HBV病毒载量：向个体单独施用治疗有效量的所公开化合物或与靶向HBV核酸的反义寡核苷酸或RNA干扰剂联合施用；并且还向个体施用治疗有效量的HBV疫苗。反义寡核苷酸或RNA干扰剂所具有的与靶HBV核酸的互补性足以抑制病毒基因组复制、病毒RNA转录、或病毒蛋白翻译。[0201]在另一个实施方案中，本发明所公开的化合物和至少一种附加治疗剂是共配制的。在另一个实施方案中，本发明所公开的化合物和至少一种附加治疗剂是共施用的。对于本文所述的任何联合治疗，可例如使用诸如以下适宜的方法计算协同增强效应：Sigmoid-Emax公式(Holford&Scheiner,19981,Clin.Pharmacokinet.6:429-453)、Loewe相加模型公式(Loewe&Muischnek,1926,Arch.Exp.Pathol Pharmacol.114:313-326)和中值效应公式(Chou&Talalay,1984,Adv.Enzyme Regul.22：2755)。可将以上提及的各个公式用于实验数据来生成对应的图，以助于评估药物的组合效应。与以上提及公式相关联的对应曲线图分别是浓度-效应曲线、等效应曲线图以及联合指数曲线。

[0202]在施用本文提供的联合治疗的方法中任一种的一个实施方案中，还方法还可包括监测或检测受试者的HBV病毒载量，其中该方法进行一定的时间段，包括直至HBV病毒不可检出的时刻。[0203]用于本说明书，特别是方案和实施例中的缩写如下：[0204]AcOH                冰醋酸[0205]aq.                 含水[0206]Bn或Bzl             苄基

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Boc                 叔丁氧羰基conc.               浓缩的DBU                 1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯DCE                 1,2-二氯乙烷DCM                 二氯甲烷DIPEA或DIEA         二异丙基-乙胺DMAP                4-二甲基氨基吡啶DMF                 N,N-二甲基甲酰胺DMSO                二甲基亚砜[0216]DMTr                [0217]DDTT                [0218]ESI                 [0219]EtOAc或EA           [0220]EtOH                [0221]h或hr(s)            [0222]HEK                 [0223]HPLC                [0224]MeOH                [0225]MHz                 [0226]min                 [0227]MS                  [0228]Ms                  [0229]NMR                 [0230]PADS                [0231]PE                  [0232]PMB                 [0233]PPh3                [0234]RP                  [0235]rt或RT              [0236]Rt                  [0237]Sec                 [0238]TBAF                [0239]TBAI                [0240]TBS                 [0241]tBuOOH              [0242]TEA或Et3N           [0243]TFA                 [0244]THF                 [0245]

TIPS                4,4'-二甲氧基三苯甲基3-[(二甲基氨基亚甲基)氨基]-3H-1,2,4-二噻唑-5-硫酮电喷射离子化乙酸乙酯乙醇一个小时或几个小时人胚肾高效液相色谱甲醇兆赫分钟质谱法甲磺酰基核磁共振苯乙酰二硫化物石油醚对甲氧基苄基三苯基膦反相室温保留时间一秒或几秒四丁基氟化铵四丁基碘化铵叔丁基二甲基甲硅烷基叔丁基过氧化氢三乙胺三氟乙酸四氢呋喃三异丙基甲硅烷基

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TLC                 薄层色谱法TMS                 四甲基硅烷Ts                  4-甲苯磺酰

式(I)或式(Ia)至(Ir)的某些化合物可根据下文方案1中所概述的方法制备。一般方案1

[0251]

因此，适当取代的式(II)的化合物(其中L1为(CH2)n＝1-2，PG1和PG2是本领域技术人

员已知的保护基团)、已知化合物或通过已知方法制备的化合物可在四丁基碘化铵和四溴化碳的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与三苯基膦、叠氮化钠反应以得到对应的式(III)的化合物，其中PG1可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG2可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。另选地，适当取代的式(II)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与甲磺酰氯、三氟甲基磺酰氯等反应以得到对应的甲磺酰基或三氟甲磺酰基类似物，该甲磺酰基或三氟甲磺酰基类似物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与叠氮化钠进一步反应以得到对应的式(III)的化合物。[0253]另一种方法可涉及在合适的溶剂(诸如吡啶或DMF等)中，在约0℃至约30℃范围内的温度下，用碘、三苯基膦和咪唑的组合处理适当取代的式(II)的化合物以得到对应的碘代类似物，该碘代类似物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与叠氮化钠进一步反应以得到对应的式(III)的化合物。

[0254]然后，式(III)的化合物可在氢化条件下，在适当选择的催化剂或催化剂体系(诸

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[0252]

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如Pd/C、Pt等)的存在下，在溶剂(诸如MeOH、EtOH、EtOAc等)中，与氢源反应以得到对应的式(IV)的化合物。另选地，式(III)的化合物可在合适的溶剂(诸如THF、DMF等)中，在约20℃至约60℃范围内的温度下与三苯基膦反应，然后在相同的温度下用水处理以得到对应的式(IV)的化合物。

[0255]式(IV)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约-78℃至约50℃范围内的温度下，与式(V)的化合物(诸如硫酰氯、4-硝基苯基氯硫酸盐等)反应以得到对应的式(VI)的化合物。

[0256]然后，式(VI)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP、Cs2CO3等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、吡啶等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与适当取代的式(VII)的化合物(其中L为(CH2)n＝1-2，PG3和PG4是本领域技术人员已知的保护基团)、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(VIII)的化合物，其中PG3可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG2可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。

[0257]然后，式(VIII)的化合物中的醇保护基团PG1和PG3可通过本领域技术人员熟知的方法，在碱性或酸性条件的存在下裂解以得到对应的式(IX)的化合物。[0258]然后，式(IX)的化合物可在合适的活化剂(诸如四唑、DMAP、5-乙硫基-1H-四唑等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如MeCN、CH2Cl2、THF、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约60℃范围内的温度下，与适当取代的式(X)的化合物(其中R8为卤素、二异丙基氨基等)、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(XI)的亚磷酸酯化合物。

[0259]然后，式(XI)的化合物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与氧化剂(诸如碘、过氧化氢、叔丁基过氧化物、Beaucage试剂、DDTT、3-氨基-1,2,4-二噻唑-5-硫酮、PADS等，或BH3.SMe2、BH3.THF复合物等)反应以生成其中R4为O、S或BH3的式(XII)的化合物。[0260]然后，式(XII)的化合物可使用条件碱性条件(诸如MeNH2、tBuNH2、氢氧化铵、Et3N.3HF等)、在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如EtOH、H2O、iPrOH等)中、在约-10℃至约120℃范围内的温度下，或通过本领域技术人员熟知的方法、在碱性或酸性条件的存在下脱保护以得到对应的式(I-a)的化合物。[0261]另选地，式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物可根据下文一般方案2中所概述的方法制备。

[0262]一般方案2

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[0263]

因此，适当取代的式(XIII)的化合物(其中L为(CH2)n＝1-2，PG1和PG4是本领域技术

人员已知的保护基团)、已知化合物或通过已知方法制备的化合物可在四丁基碘化铵和四溴化碳的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与三苯基膦、叠氮化钠反应以得到对应的式(XIV)的化合物，PG1可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG4可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。另选地，适当取代的式(XIII)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与甲磺酰氯、三氟甲基磺酰氯等反应以得到对应的甲磺酰基或三氟甲磺酰基类似物，该甲磺酰基或三氟甲磺酰基类似物然后可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与叠氮化钠进一步反应以得到对应的式(XIV)的化合物。另一种方法可涉及在合适的溶剂(诸如吡啶、DMF等)中，在约0℃至约30℃范围内的温度下，用碘、三苯基膦和咪唑的组合处理适当取代的式(XIII)的化合物以得到对应的碘代类似物，该碘代类似物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与叠氮化钠进一步反应以得到对应的式(XIV)的化合物。[0265]然后，式(XIV)的化合物可在氢化条件下，在适当选择的催化剂或催化剂体系(诸如Pd/C、Pt等)的存在下，在溶剂(诸如MeOH、EtOH、EtOAc等)中，与氢源反应以得到对应的式(XV)的化合物。另选地，式(XIV)的化合物可在合适的溶剂(诸如THF、DMF等)中，在约20℃至约60℃范围内的温度下与三苯基膦反应，然后在相同的温度下用水处理以得到对应的式(XV)的化合物。

[0266]式(XV)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA等)的存在下，在适当选择的

[0264]

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溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约-78℃至约50℃范围内的温度下，与式(V)的化合物(诸如硫酰氯、4-硝基苯基氯硫酸盐等)反应以得到对应的式(XVI)的化合物。[0267]然后，式(XVI)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP、Cs2CO3等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、吡啶等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与适当取代的式(XVII)的化合物(其中L1为(CH2)n＝1-2，PG2和PG3是本领域技术人员已知的保护基团)、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(XVIII)的化合物，其中PG3可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG2可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。然后，式(XVIII)的化合物中的醇保护基团PG1和PG3可通过本领域技术人员熟知的方法，在碱性或酸性条件的存在下裂解以得到对应的式(XIX)的化合物。[0268]然后，式(XIX)的化合物可在合适的活化剂(诸如四唑、DMAP、5-乙硫基-1H-四唑等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如MeCN、CH2Cl2、THF、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约60℃范围内的温度下，与其中R8为卤素、二异丙基氨基等的适当取代的式(X)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(XX)的亚磷酸酯化合物。[0269]然后，式(XX)的化合物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与氧化剂(诸如碘、过氧化氢、叔丁基过氧化物、Beaucage试剂、DDTT、3-氨基-1,2,4-二噻唑-5-硫酮、PADS等，或BH3.SMe2、BH3.THF复合物等)反应以生成其中R4为O、S或BH3的式(XXI)的化合物。[0270]然后，式(XXI)的化合物可使用条件碱性条件(诸如MeNH2、tBuNH2、氢氧化铵、Et3N.3HF等)、在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如EtOH、H2O、iPrOH等)中、在约-10℃至约120℃范围内的温度下，或通过本领域技术人员熟知的方法、在碱性或酸性条件的存在下脱保护以得到对应的式(I-b)的化合物。[0271]另选地，式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物可根据下文一般方案3中所概述的方法制备。

[0272]一般方案3

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[0273]

因此，适当取代的式(XXII)的化合物(其中L为(CH2)n＝1-2，PG1和PG4是本领域技术

人员已知的保护基团)、已知化合物或通过已知方法制备的化合物可在氢化条件下，在适当选择的催化剂或催化剂体系(诸如Pd/C、Pt等)的存在下，在溶剂(诸如MeOH、EtOH、EtOAc等)中，与氢源反应以得到对应的式(XXIII)的化合物，PG1可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG4可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。另选地，式(XXII)的化合物可在合适的溶剂(诸如THF、DMF等)中，在约20℃至约60℃范围内的温度下与三苯基膦反应，然后在相同的温度下用水处理以得到对应的式(XXIII)的化合物。

[0275]式(XXIII)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约-78℃至约50℃范围内的温度下，与式(V)的化合物(诸如硫酰氯、4-硝基苯基氯硫酸盐等)反应以得到对应的式(XXIV)的化合物。[0276]然后，式(XXIV)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP、Cs2CO3等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、吡啶等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与适当取代的式(XXV)的化合物(其中L1为(CH2)n＝1-2，PG2和PG3是本领域技术人员已知的保护基团)、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(XXVI)的化合物，其中PG3可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG2可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。

[0277]然后，式(XXVI)的化合物中的醇保护基团PG1和PG3可通过本领域技术人员熟知的方法，在碱性或酸性条件的存在下裂解以得到对应的式(XXVII)的化合物。[0278]然后，式(XXVII)的化合物可在合适的活化剂(诸如四唑、DMAP、5-乙硫基-1H-四唑等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如MeCN、CH2Cl2、THF、二氧杂环己烷等)

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[0274]

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中，在约-10℃至约60℃范围内的温度下，与适当取代的式(X)的化合物(其中R8为卤素、二异丙基氨基等)、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(XXVIII)的亚磷酸酯化合物。[0279]然后，式(XXVIII)的化合物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与氧化剂(诸如碘、过氧化氢、叔丁基过氧化物、Beaucage试剂、DDTT、3-氨基-1,2,4-二噻唑-5-硫酮、PADS等，或BH3.SMe2、BH3.THF复合物等)反应以生成其中R4为O、S或BH3的式(XXIX)的化合物。[0280]然后，式(XXIX)的化合物可使用条件碱性条件(诸如MeNH2、tBuNH2、氢氧化铵、Et3N.3HF等)、在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如EtOH、H2O、iPrOH等)中、在约-10℃至约120℃范围内的温度下，或通过本领域技术人员熟知的方法、在碱性或酸性条件的存在下脱保护以得到对应的式(I-c)的化合物。[0281]另选地，式(I)或式(Ia)至(Ir)的化合物可根据下文一般方案4中所概述的方法制备。

[0282]一般方案4

[0283]

因此，适当取代的式(XXX)的化合物(其中L1为(CH2)n＝1-2，PG1和PG2是本领域技术人

员已知的保护基团)、已知化合物或通过已知方法制备的化合物可在氢化条件下，在适当选择的催化剂或催化剂体系(诸如Pd/C、Pt等)的存在下，在溶剂(诸如MeOH、EtOH、EtOAc等)中，与氢源反应以得到对应的式(XXXI)的化合物，PG1可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG2可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。另选地，式(XXX)的化合物可在合适的溶剂(诸如THF、DMF等)中，在约20℃至约60℃范围内的温度下与三苯基膦反应，然后在相同的温度下用水处理以得到对应的式(XXXI)的化合物。

[0285]式(XXXI)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约-78℃至约50℃范围内的

[0284]

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温度下，与式(V)的化合物(诸如硫酰氯、4-硝基苯基氯硫酸盐等)反应以得到对应的式(XXXII)的化合物。[0286]然后，式(XXXII)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP、Cs2CO3等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、吡啶等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与适当取代的式(XXXIII)的化合物(其中L为(CH2)n＝1-2，PG3和PG4是本领域技术人员已知的保护基团)、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(XXXIV)的化合物，其中PG3可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG2可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。

[0287]然后，式(XXXIV)的化合物中的醇保护基团PG1和PG3可通过本领域技术人员熟知的方法，在碱性或酸性条件的存在下裂解以得到对应的式(XXXV)的化合物。[0288]然后，式(XXXV)的化合物可在合适的活化剂(诸如四唑、DMAP、5-乙硫基-1H-四唑等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如MeCN、CH2Cl2、THF、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约60℃范围内的温度下，与其中R8为卤素、二异丙基氨基等的适当取代的式(X)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(XXXVI)的亚磷酸酯化合物。[0289]然后，式(XXXVI)的化合物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与氧化剂(诸如碘、过氧化氢、叔丁基过氧化物、Beaucage试剂、DDTT、3-氨基-1,2,4-二噻唑-5-硫酮、PADS等，或BH3.SMe2、BH3.THF复合物等)反应以生成其中R4为O、S或BH3的式(XXXVII)的化合物。

[0290]然后，式(XXXVII)的化合物可使用条件碱性条件(诸如MeNH2、tBuNH2、氢氧化铵、Et3N.3HF等)、在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如EtOH、H2O、iPrOH等)中、在约-10℃至约120℃范围内的温度下，或通过本领域技术人员熟知的方法、在碱性或酸性条件的存在下脱保护以得到对应的式(I-d)的化合物。[0291]一般方案5

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[0292]

因此，式(XVIII)的化合物(其中A2为(CH2)n＝1-2，PG1、PG2、PG3和PG4是本领域技术人

员已知的保护基团)、已知化合物或通过已知方法制备的化合物中的醇保护基团PG3可在醇保护基团PG1的存在下，通过本领域技术人员熟知的方法，在碱性或酸性条件的存在下选择性裂解以得到对应的式(XXXVIII)的化合物，PG1和PG3可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG2和PG4可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。

[0294]式(XXXVIII)的化合物可在四丁基碘化铵和四溴化碳的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与三苯基膦、叠氮化钠反应以得到对应的式(XXXIX)的化合物。另选地，适当取代的式(XVIII)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与甲磺酰氯、三氟甲基磺酰氯等反应以得到对应的甲磺酰基或三氟甲磺酰基类似物，该甲磺酰基或三氟甲磺酰基类似物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与叠氮化钠进一步反应以得到对应的式(XXXIX)的化合物。[0295]另一种方法可涉及在合适的溶剂(如吡啶或DMF等)中，在约0℃至约30℃范围内的温度下，用碘、三苯基膦和咪唑的组合处理适当取代的式(XVIII)的化合物以得到对应的碘代类似物，该碘代类似物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与叠氮化钠进一步反应以得到对应的式(XXXIX)的化合物。

[0296]然后，式(XXXIX)的化合物可在氢化条件下，在适当选择的催化剂或催化剂体系(诸如Pd/C、Pt等)的存在下，在溶剂(诸如MeOH、EtOH、EtOAc等)中，与氢源反应以得到对应

[0293]

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的式(XXXX)的化合物。另选地，式(XXXIX)的化合物可在合适的溶剂(诸如THF、DMF等)中，在约20℃至约60℃范围内的温度下与三苯基膦反应，然后在相同的温度下用水处理以得到对应的式(XXXX)的化合物。

[0297]式(XXXX)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约-78℃至约50℃范围内的温度下，与式(V)的化合物(诸如硫酰氯、4-硝基苯基氯硫酸盐等)反应以得到对应的式(XXXXI)的化合物。然后，式(XXXIV)的化合物中的醇保护基团PG1可通过本领域技术人员熟知的方法，在碱性或酸性条件的存在下裂解以得到对应的式(XXXXII)的化合物。[0298]式(XXXXII)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP、Cs2CO3等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、吡啶等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下反应以得到对应的式(XXXXIII)的化合物。[0299]然后，式(XXXXIII)的化合物可使用碱性条件(诸如MeNH2、tBuNH2、氢氧化铵、Et3N.3HF等)、在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如EtOH、H2O、iPrOH等)中、在约-10℃至约120℃范围内的温度下，或通过本领域技术人员熟知的方法、在碱性或酸性条件的存在下脱保护以得到对应的式(I-e)的化合物。[0300]本发明的方面

[0301]本发明的非限制性方面包括以下方面：[0302]方面1：一种式(I)的化合物：

[0303]

[0304]

其中

[0305]B1和B2独立地选自b1、b2、b3、b4、b5、b6、b7、b8、b9、b10、b11、b12、b13、b14、b15、b16、b17、b18、b19、b20、b21、b22、b23、b24和b25

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[0306]

R1独立地选自氢；羟基；氟；任选独立地被一至七个卤素取代基、甲氧基或C6-10芳基

取代的C1-3烷氧基；其中所述C6-10芳基任选独立地被一至二个取代基取代，该取代基独立地选自氟、氯、溴、碘、C1-3烷氧基、C1-3烷基、羟基、硝基和氰基；C3-6烯氧基；C2-6炔氧基；羟基(C1-3)烷氧基；或者任选独立地被一至三个选自氟、氯、溴、碘或羟基的取代基取代的C1-3烷基；

[0308]R1'独立地选自氢、氟或羟基；前提条件是当R1'为氟时，R1为氢或氟；[0309]R2独立地选自氢；羟基；氟；任选独立地被一至七个卤素取代基、甲氧基或C6-10芳基取代的C1-3烷氧基；其中所述C6-10芳基任选独立地被一至二个取代基取代，该取代基独立地选自氟、氯、溴、碘、C1-3烷氧基、C1-3烷基、羟基、硝基和氰基；C3-6烯氧基；C2-6炔氧基；羟基(C1-3)烷氧基；或者任选独立地被一至三个选自氟、氯、溴、碘或羟基的取代基取代的C1-3烷基；并且R3为氢；[0310]或者，R3为-CH2-并且R2为-O-；使得R2、R3以及它们所连接的原子形成5元环；[0311]R2'独立地选自氢、氟或羟基；前提条件是当R2'为氟时，R2为氢或氟；[0312]R3独立地选自氢、氟、CH3或CH2F；[0313]X1和X2独立地选自O、S和CH2；

[0314]L和L1独立地选自-CH2-和-CH2CH2-；

[0315]Y和Y1各自独立地不存在或者选自O和NH；[0316]Z和Z1独立地选自O和NH；

[0307]

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1

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M和M中的一者为并且M和M

1

中的另一者独立地选自

[0318]使得当M为时，Y和Z中的一者为NH，并且Y和Z中的另一者为O；

[0319]并且，使得当M1为时，Y1和Z1中的一者为NH，并且Y1和Z1中的另一者为O；

[0320]前提条件是当Y不存在时，L为-CH2CH2并且M为

[0321][0322]

前提条件是当Y1不存在时，L1不存在并且M1为

R4独立地选自羟基、甲基、BH3和-SR5；其中R5独立地选自氢、-CH2OC(O)R6、-CH2OC

(O)OR6、-CH2CH2SC(O)R6和-CH2CH2S-SCH2R6；[0323]R6独立地选自C6-10芳基、杂芳基、杂环烷基、C3-12环烷基、以及任选独立地被一至五个氟或羟基取代基、C1-6烷基、C6-10芳基或C3-12环烷基取代的C1-20烷基；[0324]或者其对映体、非对映体或药学上可接受的盐形式。[0325]方面2：根据方面1所述的化合物，其中B1和B2各自为b6。

[0326]

[0327]

方面3：根据方面1所述的化合物，其中B1为b7并且B2为b6。

[0328]

[0329]

方面4：根据方面1所述的化合物，该化合物为：

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[0333]

或其药学上可

接受的盐形式。[0334]方面5：一种药物组合物，该药物组合物包含药学上可接受的载体、药学上可接受的赋形剂和药学上可接受的稀释剂中的至少一种以及根据方面1至4中任一项所述的化合物。

[0335]方面6：根据方面5所述的药物组合物，其中组合物为固体口服剂型。[0336]方面7：根据方面5所述的药物组合物，其中组合物为糖浆、酏剂或悬浮液。[0337]方面8：一种药物组合物，该药物组合物包含药学上可接受的载体、药学上可接受的赋形剂和药学上可接受的稀释剂中的至少一种以及根据方面4所述的化合物。[0338]方面9：一种治疗由STING调制的疾病、综合征或病症的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的根据方面1所述的化合物。[0339]方面10：一种治疗疾病、综合征或病症的方法，其中所述疾病、综合征或病症受STING激动的影响，该方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的根据方面1所述的化合物。

[0340]方面11：根据方面10所述的方法，其中所述疾病、综合征或病症为癌症。[0341]方面12：根据方面11所述的方法，其中所述癌症选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌和纤维肉瘤。[0342]方面13：根据方面10所述的方法，其中所述疾病、综合征或病症为病毒感染。[0343]方面14：根据方面13所述的方法，其中病毒感染为乙型肝炎。[0344]方面15：一种治疗疾病、综合征或病症的方法，该疾病、综合征或病症选自病毒感染、黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌和纤维肉瘤，该方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的根据方面5所述的组合物。[0345]方面16：根据方面15所述的方法，其中病毒感染为乙型肝炎。

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方面17：根据方面1所述的化合物在制备用于治疗对其有需要的受试者中的疾病、

综合征或病症的药物中的用途，该疾病、综合征或病症选自病毒感染、黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌和纤维肉瘤。[0347]方面18：根据方面1所述的化合物在用于治疗对其有需要的受试者中的疾病、综合征或病症的方法中的用途，该疾病、综合征或病症选自病毒感染、黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌和纤维肉瘤。[0348]实施例1：化合物1

[0349]

[0350]

步骤1：在0℃下，向中间体1a(7.5g，20.08mmol)、三苯基膦(7.90g，30.13mmol)、TBAI(1.48g，4.01mmol)和NaN3(5.22g，80.35mmol)在DMF(80mL)中的搅拌悬浮液中分批加入CBr4(9.99g，30.13mmol)，得到黄色悬浮液。在室温下搅拌2小时并在35℃下加热48小时后，将反应混合物与另一批次(相同规模)合并，并在剧烈搅拌下缓慢添加到600mL饱和NaHCO3水溶液、500mL MTBE和40mL EtOAc的混合物(三相)中。通过过滤收集形成的沉淀物；将滤饼转移到100mL烧瓶中，向其中加入40mL DCM和8mL EtOH；将所得悬浮液进行超声处理并搅拌30分钟。然后通过过滤收集固体并在真空下干燥，得到为白色固体的中间体1b

1

(12.9g)。H NMR(400MHz,DMSO-d6)11.28(br d,J＝1.7Hz,1H),8.82-8.69(m,1H),8.62(s,

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[0351]

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1H),8.05(br d,J＝7.3Hz,2H),7.69-7.59(m,1H),7.59-7.48(m,1H),6.41(br d,J＝19.8Hz,1H),5.95(br s,1H),5.78-5.55(m,1H),4.86-4.70(m,1H),4.12(br s,1H),3.81-193.69(m,1H),3.57(br dd,J＝5.7,13.6Hz,1H),3.34(s,4H)；F NMR(376MHz,DMSO-d6)-201.61(td,J＝20.5,52.8Hz)，ESI-MS：m/z＝398.9[M+H]+。[0352]步骤2：在使用前将中间体1b与吡啶(60mL)共蒸发两次。在5℃下向中间体1b(6g，15.06mmol)的吡啶(60mL)溶液中加入DMTrCl(10.2g，30.12mmol)和DMAP(920mg，7.53mmol)。在80℃下将反应混合物搅拌18小时，得到黄色溶液。将反应混合物与另一批次(相同规模)合并，并减压浓缩；将残余物溶于DCM(150mL)中，并在剧烈搅拌下缓慢倒入饱和NaHCO3水溶液(100mL)中。用DCM(100mL×2)萃取水层。然后合并有机层，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到黄色残余物。通过硅胶快速柱色谱法(梯度0％至100％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为黄色固体的中间体1c(12.6g，88％)。ESI-MS：m/z＝701.1[M+H]+。[0353]步骤3：在室温下将PPh3(6.6g，25.1mmol)一次性添加到中间体1c(12.6g，17.98mmol)的THF(100mL)溶液中；在N2下于40℃下搅拌2小时后，添加H2O(50mL)，并将所得混合物再搅拌12小时，得到无色溶液。然后将反应混合物减压浓缩，并将残余的水层在DCM/H2O(80mL/30mL)之间分配。用DCM(40mL×2)萃取水层。然后合并有机层，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到白色固体。通过硅胶快速柱色谱法(梯度0％至5％MeOH的DCM溶液)纯化，

1

得到为白色固体的中间体1d(11.6g)。H NMR(400MHz,CDCl3)8.93(br s,1H),8.71(s,1H),8.31(s,1H),8.01(br d,J＝7.3Hz,2H),7.33-7.19(m,4H),6.82(dd,J＝6.9,8.9Hz,4H),6.17(dd,J＝1.5,17.6Hz,1H),4.64(ddd,J＝4.4,7.6,19.4Hz,1H),4.57-4.36(m,1H),4.18-4.08(m,1H),3.77(d,J＝5.3Hz,6H),2.94(dd,J＝2.4,14.2Hz,1H),2.64(dd,J＝4.3,

19

14.3Hz,1H)；F NMR(376MHz,CDCl3)-197.03(br s,1F)，ESI-MS：m/z＝675.1[M+H]+。[0354]步骤4：在-78℃和N2下，将4-硝基苯基氯硫酸盐(768mg，3.23mmol)的无水CH2Cl2(5mL)溶液快速添加到中间体1d(727mg，1.07mmol)、4-硝基苯酚(449mg，3.23mmol)、Et3N(654mg，6.46mmol)和活化的

分子筛(约1g)在无水CH2Cl2(15mL)中的混合物中。然后将

反应混合物在1.5小时内逐渐升温至室温。将反应混合物与其它批次合并，并通过硅藻土垫过滤。将滤液用饱和NaHCO3水溶液(200mL×4)洗涤。然后合并有机层，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到黄色残余物，残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度0％至100％EtOAc的石油

1

醚溶液)纯化，得到为浅黄色固体的中间体1e(16g，70％)。H NMR(400MHz,CDCl3)8.93-8.81(m,2H),8.41(s,1H),8.11-7.92(m,5H),7.67-7.58(m,1H),6.86(br t,J＝7.7Hz,4H),6.20(br dd,J＝5.1,13.7Hz,1H),5.34-5.23(m,2H),5.16(br t,J＝5.1Hz,1H),4.73(br s,1H),3.90(br s,1H),3.79(d,J＝6.4Hz,6H),3.23(br d,J＝13.2Hz,1H),2.89(br dd,J＝

19

8.7,12.6Hz,1H)；F NMR(376MHz,CDCl3)-199.28--205.90(m,1F)。ESI-MS：m/z＝876.1[M+H]+。

[0355]将中间体1e(750mg，0.857mmol)和中间体1f(482mg，0.714mmol)溶于无水THF(8mL)中。将活性分子筛粉末(2g，)添加到混合物中。在室温下搅拌1小时后，将DMAP(435mg，7.4mmol)添加到混合物中。在室温下搅拌反应混合物40小时后，通过过滤除去分子筛粉末，用EtOAc(100mL)彻底洗涤。依次用饱和NaHCO3水溶液(1×20mL)、饱和NaCl水溶液(1×20mL)和去离子H2O(1×20mL)洗涤有机层。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液减压浓缩。粗制残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至15％MeOH的DCM溶液)纯化，得到

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为固体的中间体1g(880mg，收率：72％)。ESI-MS：m/z 1412[M+H]+。步骤6：向中间体1g(800mg，0.566mmol)的DCM(10mL)溶液中添加三乙基硅烷(5mL)和6％DCA的DCM(10mL)溶液。在室温下搅拌反应混合物40分钟后，将其用EtOAc(50mL)稀释，并用饱和NaHCO3水溶液(1×20mL)和饱和NaCl水溶液(1×20mL)洗涤。用EtOAc(1×35mL)萃取水相，并将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。所得粗制残余物通过硅胶快速柱色谱(梯度洗脱：0％至15％MeOH的EtOAc溶液)纯化，得到为白色固体的中间体1h(408mg，收率：89％)。ESI-MS：m/z 808[M+H]+。[0356]步骤7：将中间体1h(84mg，0.104mmol)与无水甲苯:乙腈(1:1，v/v，3×10mL)的混合物共蒸发，然后溶于无水THF(5mL)中，并且超声处理5分钟，以完全溶解1h。然后向混合物中添加分子筛粉末(0.5g)和0.45M四唑的乙腈溶液(1.15mL，0.52mmol)。将所得异质混合物用氩气鼓泡4分钟。在室温下将该混合物搅拌10分钟后，在室温下于30分钟内向其中添加2-氰基乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(47mg，0.156mmol，1.5当量，在2mL CH3CN中)。将反应混合物搅拌1.5小时后，过滤混合物，并用EtOAc洗涤固体。将合并的滤液减压浓缩，获得亚磷酸盐中间体。MS：m/z 907[M+H]+。所得混合物直接用于下一步骤中。添加碘(0.5M THF:H2O:Py 8:1:1(v/v/v)溶液)。在室温下搅拌反应混合物30分钟后，然后用EtOAc(30mL)进行稀释。用饱和Na2S2O3水溶液猝灭过量的碘。分离有机相和水相。依次用饱和NaHCO3水溶液(1×20mL)、饱和NaCl水溶液(1×20mL)洗涤有机层。用EtOAc(1×20mL)萃取水层。将合并的有机层减压浓缩至干。所得粗制物质通过硅胶快速柱色谱(梯度0％至10％MeOH的二氯甲烷溶液)纯化，得到中间体1i(45mg)。ESI-MS：m/z 923[M+H]+。[0357]步骤8：在室温下，将甲胺在乙醇(6mL)中的饱和溶液与中间体1i(45mg)混合。在室温下搅拌2小时后，将反应混合物减压浓缩。将所得粗制固体用DCM(15mL)洗涤，并且通过过滤收集沉淀物并通过制备型反相HPLC(柱：Synergi 4μm，Hydro RP，250mm×30mm，流动相：缓冲液A：50mM三乙基乙酸铵的H2O溶液；缓冲液B：50mM三乙基乙酸铵的CH3CN溶液，梯度：0％至40％的B，经过30分钟，流速24mL/分钟)进行纯化，得到为三乙基乙酸铵盐的化合物1(9.1mg)。ESI-MS：m/z：660[M-1]-。[0358]将Dowex 50W×8，200-400(5mL，H形式)加入到烧杯中并用去离子水(30mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液，将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(30mL)。将树脂转移到在去离子水中具有15％H2SO4的柱中并用15％H2SO4(至少4个柱体积[CV])洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至柱为pH中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的水溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至柱为pH中性。将化合物1TEAA盐(9.1mg)溶于最小量的去离子水中，添加到柱的顶部，并且用去离子水洗脱。将基于UV的CDN的适当

1

级分合并在一起并冻干，以得到为白色絮凝固体的化合物1(8.45mg)。H NMR(400MHz,D2O)：δ7.85-7.95(m,3H),6.89(br.s,1H),6.10-6.20(m,2H),5.71(d,J＝3.2Hz,0.5H),5.58(d,J＝3.2Hz,0.5H),5.20-5.30(m,1.5H),5.10-5.16(m,0.5H),4.80-4.90(m,1H),4.56(d,J＝8.4Hz,1H),4.35-4.43(m,2H),4.01-4.07(m,1H),3.71(d,J＝13.2Hz,1H),3.41(d,J＝

3119

13.2Hz,1H)。P NMR(162MHz,D2O)：δ-1.67；F NMR(379MHz,D2O)：δ两个宽峰-197.03，-200.48ppm。ESI-MS：m/z:660[M-H]-。[0359]实施例2：化合物(*R)2和(*S)3

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[0360]

步骤1：将中间体1h(140mg，0.173mmol)与无水甲苯/乙腈溶剂混合物(1:1，v/v，3

×30mL)共蒸发，然后溶于无水THF(8mL)中，并且超声处理5分钟，直至中间体1h完全溶解。然后向混合物中添加分子筛粉末(1g)和0.45M四唑的乙腈溶液(3.0mL，1.38mmol)。将所得异质混合物用氩气鼓泡4分钟。在室温下将该混合物搅拌10分钟后，在室温下于30分钟内向其中添加2-氰基乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(84mg，在3.08mL的CH3CN中，0.277mmol)。搅拌90分钟后，过滤反应混合物，并且用THF(15mL)洗涤固体。将合并的滤液减压浓缩。将DDTT(177mg，0.865mmol)的吡啶(5mL)溶液添加到获得的残余物中。在室温下搅拌30分钟后，将反应混合物用EtOAc(30mL)稀释，并用饱和NaHCO3水溶液(1×20mL)和盐水(1×20mL)洗涤。用EtOAc(1×40mL)萃取水相。将合并的有机层浓缩至干，并且获得的残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％至10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为P-异构体的混合物的中间体2a(220mg)。ESI-MS：m/z 939[M+H]+。[0362]步骤2：使中间体2a(220mg)在室温下经受甲胺的浓乙醇溶液(10mL)。搅拌2.5小时后，将反应混合物减压浓缩。将所得粗制固体用DCM(15mL)洗涤，并且通过过滤收集沉淀物并通过制备型反相HPLC(固定相：Synergi 4μm，Hydro RP，250mm×30mm，流动相：缓冲液A：50mM三乙基乙酸铵的H2O溶液；缓冲液B：50mM三乙基乙酸铵的CH3CN溶液，梯度：0％至40％的B，经过30分钟，流速24mL/分钟)进行纯化，得到作为第二洗脱异构体的化合物(*R)2(11.2mg)和作为第一洗脱异构体的化合物(*S)3(12.8mg)。[0363]将Dowex 50W×8，200-400(5mL，H形式)加入到烧杯中并用去离子水(30mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液，将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(30mL)。将树脂转移到在去离子水中具有15％H2SO4的柱中并用15％H2SO4(至少4个柱体积[CV])洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为pH中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的

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H2O溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为pH中性。将三乙胺类似物2(11.2mg)和3(12.8mg)溶于最小量的去离子水中，添加到柱的顶部，并且用去离子水洗脱。

1

将适当的级分合并在一起并冻干，得到为白色絮状固体的化合物(*R)2，钠盐(10.9mg)。H NMR(400MHz,D2O)：δppm 8.22(s,1H),7.97(s,1H),7.68(s,1H),7.27(s,1H),6.20-6.33(m,2H),5.68(d,J＝4.4Hz,0.5H),5.55(d,J＝4.4Hz,0.5H),5.51(d,J＝4.4Hz,0.5H),5.38(d,J＝4.4Hz,0.5H),5.20-5.32(m,1H),4.90-4.99(m,1H),4.50(d,J＝8.8Hz,1H),4.38(d,J＝9.6Hz,1H),4.31(d,J＝12Hz,1H),4.01(dd,J＝4.4and 12Hz,1H),3.66(d,J＝12Hz,1H),

3119

3.33(d,J＝12Hz,1H)；P NMR(162MHz,D2O)：δppm 54.368；F NMR(379MHz,D2O)：δppm两个宽峰-198.08,-200.09；ESI-MS：m/z:676[M-H]-。

1[0364]使用类似的方案，将化合物(*S)3转化为其钠盐(12.1mg)。H NMR(400MHz,D2O)：δ

ppm 7.90(m.3H),6.92(br.s,1H),6.10-6.15(m,2H),5.69(d,J＝3.6Hz,0.5H),5.57(d,J＝3.6Hz,0.5H),5.20-5.28(m,1.5H),5.14(br.s,0.5H),4.90-4.97(m,1H),4.52-4.60(m,1H),4.47(d,J＝12Hz,1H),4.39(d,J＝9.6Hz,1H),3.98(dd,J＝6.4and 12Hz,1H),3.69(d,

3119

J＝12Hz,1H),3.35(d,J＝12Hz,1H)；P NMR(162MHz,D2O)：δppm 55.136；F NMR(379MHz,D2O)：δ两个宽峰-196.439，-200.613ppm；ESI-MS m/z：676[M-H]-。[0365]化合物(*S)15、(*R)15、(*R)16、(*S)16、(*S)18、(*R)18、(*S)20、(*R)20、(*R)22、(*S)22、(*R)31、(*S)31、(*S)34和(*R)34以类似的方式从选自中间体S1至S7以及A1至A27的适当中间体开始制备，并且分析数据示于表2中。

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[0368][0369]

注：化合物(*R)2和(*S)3另选地根据实施例10制备。实施例3：化合物5

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[0370]

步骤1：将咪唑(18.2g，267.9mmol)、三苯基膦(52.7g，200.9mmol)和碘(51.0g，

201.6mmol)添加到N6-苯甲酰基-2'-脱氧-2'-氟腺苷(1a，50g，113.9mmol)的无水吡啶溶液中。在N2下，将反应混合物在0℃至5℃下搅拌12小时，之后将其浓缩至干。将获得的残余物溶于DCM(500mL)中，然后添加饱和碳酸氢钠水溶液(500mL)。将所得悬浮液搅拌30分钟，之后通过过滤收集沉淀物。将滤饼从MeCN/H2O(8/1，400mL)中重结晶，得到中间体3a(42g，收

1

率：65％)。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.26(br s,1H),8.77(s,1H),8.65(s,1H),8.06(d,J＝7.5Hz,2H),7.64(t,J＝7.5Hz,1H),7.55(t,J＝7.5Hz,2H),6.42(dd,J＝19.5,1.5Hz,1H),6.01(br s,1H),5.74(dd,J＝52.5,2.5Hz),4.57(dt,J＝20,6.5Hz,1H),3.96(dd,J＝10.5,6Hz,1H),3.67(dd,J＝11.3,3.8Hz,1H),3.50(dd,J＝11,6.5Hz,1H)；ESI-MS：m/z 484.4[M+H]+。[0372]步骤2：将叠氮化钠(8.07g，124.2mmol)添加到中间体3a(20g，41.4mmol)的无水DMF溶液中。在N2下，将反应混合物在85℃下搅拌2小时。将反应溶液冷却至室温，倒入到水(2L)中，并且搅拌30分钟。通过过滤收集沉淀物并干燥以得到中间体3b(15g，收率：90％)。

[0371]

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H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.22(s,1H),8.79(s,1H),8.66(s,1H),8.06(d,J＝7.5Hz,2H),7.65(t,J＝7.3Hz,1H),7.56(t,J＝7.5Hz,2H),6.43(d,J＝19.5Hz,1H),5.93(d,J＝6Hz,1H),5.68(dd,J＝52.8,2.8Hz),4.80-4.75(m,1H),4.14(br s,1H),3.76(dd,J＝13.5,2.5Hz,1H),3.59(dd,J＝13.8,5.8Hz,1H)；ESI-MS：m/z 399.0[M+H]+。[0373]步骤3：将TBSCl(6.81g，45.2mmol)和咪唑(3.84g，56.5mmol)添加到中间体3b(15g，37.7mmol)的无水DMF溶液中。在N2保护下，将反应混合物在室温下搅拌24小时，之后在55℃下进行真空浓缩。将所得残余物溶于EtOAc中并用水洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并在45℃下减压蒸发至干。粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：20％至40％EtOAc的

1

庚烷溶液)纯化，得到中间体3c(16g，收率：83％)。H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 0.18(s,6H),0.95(s,9H),3.52(dd,J＝13.6,4.3Hz,1H),3.78(dd,J＝13.6,3.0Hz,1H),4.25(m,J＝7.2,3.5,3.5Hz,1H),4.85(ddd,J＝18.8,7.5,4.5Hz,1H),5.53(ddd,J＝53.0,4.5,1.8Hz,1H),6.24(dd,J＝18.2,1.9Hz,1H),7.50-7.58(m,2H),7.59-7.67(m,1H),7.99-8.08(m,2H),8.23(s,1H),8.80(s,1H),9.04(br s,1H)；ESI-MS：m/z 513.1[M+H]+。[0374]步骤4：将三苯基膦(12.28g，46.8mmol)添加到中间体3c(16g，31.2mmol)的THF溶液中。将反应混合物在室温下搅拌10分钟，之后在30分钟内滴加水(2.25g，124.9mmol)。继续搅拌直至完全转化。添加pTSA(5.4g)并再继续搅拌10分钟。将反应溶液减压蒸发至干，将所得残余物溶于DCM中并用水洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。粗制物质通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：1％至5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为其pTSA盐的中间体3d

1

(12g，收率：58％)。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.18(s,3H),0.17(s,3H),0.95(s,9H),2.29(s,3H),3.26-3.28(br m,2H),4.24(br m,1H),4.86-4.93(m,1H),5.82(dt,J＝52,3.6Hz,1H),6.51(dd,J＝18.2,2.6Hz,1H),7.13(d,J＝7.6Hz,2H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.56(t,J＝7.6Hz,1H),7.67(t,J＝7.4Hz,1H),8.00(br s,2H),8.06(d,J＝7.6Hz,1H),8.82(d,J＝7.6Hz,1H)；ESI-MS：m/z 487.2[M+H]+。[0375]步骤5：将中间体3d(16g的pTSA盐，24.3mmol)、4-硝基苯酚(33.8g，242.9mmol)和Et3N(29.5g，6.98mmol)溶于DCM(320ml)中。将反应混合物冷却至–78℃，之后滴加4-硝基苯基氯硫酸盐(12.7g，53.5mmol)的DCM(80mL)溶液。使反应溶液温热至0℃，用DCM稀释并用1.0M当量的NaH2PO4洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。粗制物质通过硅胶柱色

1

谱法纯化(梯度洗脱：1％至5％DCM的MTBE溶液)，得到纯的中间体3e(9.5g，收率：87％)。H NMR(500MHz,氯仿-d)δppm：9.30(br s,1H),8.89(br s,1H),8.52(s,1H),8.27(d,J＝7.5Hz,2H),8.15-8.11(m,1H),8.02(d,J＝7.5Hz,2H),7.64(t,J＝7.5Hz,1H),7.54(t,J＝8Hz,2H),7.41-7.38(m,2H),6.14(q,J＝5and 13Hz,1H),5.55-5.43(m,1H),4.72-4.69(m,1H),4.41(s,1H),3.69(t,J＝11Hz,2H),0.93(s,9H),0.16(s,6H)；ESI-MS：m/z 688.6[M+H]+。

[0376]步骤6：将中间体3e(0.70g，1.02mmol)、5'-O-DMT-2'-F-脱氧肌苷(1f，0.87g，1.53mmol)和DMAP(0.62g，5.1mmol)分别溶于无水DCM(3×4.0mL，使用前在适当的干燥剂上干燥)，向每种溶液中添加大量活化的分子筛，然后在惰性气氛下振摇至少1.5小时。向容纳DMAP溶液的烧瓶中添加5'-O-DMT-2'-F-脱氧肌苷溶液，然后添加中间体3e溶液(在两种情况下，均通过倒入包括分子筛在内的整个混合物进行转移)。将所得反应混合物搅拌过夜。通过过滤除去分子筛并用二氯甲烷充分洗涤。将滤液用饱和NaHCO3水溶液洗涤，然后用DCM

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(2×50mL)萃取水相。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：1％至10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到纯的中间体3f(540mg，收率：47％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δppm 12.09(br s,1H),9.42(br s,1H),9.23(br d,J＝7.8Hz,1H),8.78(s,1H),8.15(s,1H),8.06(d,J＝7.2Hz,2H),7.98(s,1H),7.89(s,1H),7.53-7.14(m,13H),6.82(d,J＝8.7Hz,4H),6.15-6.04(m,2H),5.63-5.36(m,3H),4.70-4.63(br m,1H),4.41-4.36(m,2H),3.73(s,6H),3.64-3.45(m,4H),0.94(s,9H),0.17(s,3H),0.15(s,3H)；ESI-MS：m/z 1121.9[M+H]+；1143.9[M+Na]+。[0377]步骤7：将TBAF(1.07mL，1M THF溶液，1.07mmol)添加到中间体3f(598mg，0.53mmol)的THF(9.4mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜，之后用EtOAc稀释并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发。将所得残余物溶于DCM(24mL)中，向其中加入水(48μL，2.6mmol)和二氯乙酸(170μL，2.4mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时，之后加入吡啶(220μL，2.7mmol)和一些甲醇。将所得混合物部分地减压浓缩，并转移到硅胶柱以进行纯化(梯度洗脱：7％至15％甲醇/二氯甲烷)，得到中间体3g

1

(360mg，收率：96％)。H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 12.48(br s,1H),11.26(s,1H),8.76(s,1H),8.67(br s,1H),8.64(s,1H),8.34(s,1H),8.10(d,J＝3.6Hz,1H),8.05(d,J＝7.2Hz,2H),7.68–7.63(m,1H),7.58–7.53(m,2H),6.43–6.36(dd,J＝20.1,2.1Hz,1H),6.34–6.28(dd,J＝16.5,3.0Hz,1H),5.94(d,J＝6Hz,1H),5.79–5.70(m,1H),5.62–5.52(m,1H),5.36(t,J＝5.3Hz,1H),5.26–5.18(m,1H),4.69–4.56(br m,1H),4.29–4.27(m,1H),4.13–4.05(m,1H),3.78–3.73(m,1H),3.62–3.34(m,4H)；ESI-MS：m/z 705.5[M+H]+；727.5[M+Na]+；806.7[M+TEA]+。[0378]步骤8：中间体3g(180mg，0.255mmol)和1H-四唑(0.45M MeCN溶液(在分子筛(珠)上预干燥)，1.13mL，0.51mmol)的1:1:1MeCN/THF/DCM(6.9mL)溶液用分子筛(珠)处理至少2小时，之后加入2-氰基乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(77mg，0.255mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。将另外的2-氰基乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(115.3mg，0.383mmol)分三等份加入反应混合物中直至反应完成。接下来，加入tBuOOH(120μL的5.5M癸烷溶液，0.64mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌30分钟。将反应混合物用DCM稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。用EtOAc和DCM再次萃取水相。将合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：2％至15％MeOH的DCM溶液)纯化，得到中间体3h(22.7mg，收率：11％)，将其原样用于随后的脱保护步骤。ESI-MS：m/z 818.6[M-H]-。[0379]步骤9：在室温下，将中间体3h(22.7mg，27μmol)在28％氢氧化铵水溶液和乙醇的混合物(3/1，2.5mL)中搅拌过夜。真空浓缩后的所得粗制产物通过制备型反相HPLC纯化(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，250×30mm；流动相：0.25％碳酸氢氨水溶液(A)-MeOH(B))，得到为铵盐的化合物5。通过在填装有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液将化合物5转

1

化为钠盐，冻干后得到7.5mg(收率：35％)为白色蓬松固体的化合物5。H NMR(400MHz,DMSO-d6,100℃)δppm 8.72(br s,1H),8.24(s,1H),8.07(s,1H),7.88(s,1H),6.87(br s,2H),6.28(d,J＝18.7Hz,1H),6.29(d,J＝17.9Hz,1H),5.38-5.65(m,1H),5.31(br s,1H),5.25(dd,J＝52.1,3.7Hz,1H),5.08(dtd,J＝24.5,8.5,8.5,4.1Hz,1H),4.26(br d,J＝7.7Hz,1H),4.19(br d,J＝9.0Hz,1H),4.12(dt,J＝12.2,2.0Hz,1H),3.81(ddd,J＝12.4,

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4.3,1.2Hz,1H),3.53(br dd,J＝13.6,3.5Hz,1H),3.24(br d,J＝13.4Hz,1H)；P NMR(162MHz,DMSO-d6,100℃)δppm-2.28(s,1P)；ESI-MS：m/z 663.3[M+H]+。[0380]实施例4：化合物(*R)17和化合物(*S)17

[0381]

步骤1：(注：使用前将反应溶剂在适当的干燥剂上干燥。)在N2下，将中间体3g(0.5g，0.71mmol)和1H-四唑(8.28mL的3％至4％MeCN溶液，使用前在分子筛上干燥)的无水THF/MeCN(1:1，100mL)溶液用活化的分子筛处理1小时。一次性加入2-氰基乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(230μL，0.71mmol)，将反应混合物振摇5小时。加入额外量的2-氰基乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(110μL，0.35mmol)，并继续振摇2小时。接下来，加入PADS(0.43g，1.42mmol)，将反应混合物振摇18小时。通过过滤除去分子筛并用二氯甲烷冲洗。将滤液用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到为P-表异构体混合物的中间体4a。通过硅胶柱色谱法分离异构体(梯度洗脱：0％至10％MeOH的DCM溶液)，得到作为第一洗脱异构体的中间体4a1(77g，收率：11％，纯度：85％)和作为第二洗脱异构体的中间体4a2(62mg，收率：3％，纯度：62％)。中间体4a1：ESI-MS:m/z 836.4[M+H]+；中间体4a2：ESI-MS:m/z 836.4[M+H]+。

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[0382]

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步骤2：将上述中间体4a1在甲胺的浓乙醇溶液(4mL)中在45℃下搅拌1小时。将反

应混合物减压蒸发至干。在乙腈(3mL)中研磨残余物。滤出沉淀物，并通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，10μm，150×50mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeOH(B)；梯度洗脱)纯化，冻干后得到为白色固体的化合物(*R)17。通过在填装有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的转化，冻干后得到白色蓬松固体(26mg，收率：

1

46％)。H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δppm 3.15-3.34(m,1H)3.51-3.62(m,1H)3.71-3.82(m,1H)4.16-4.40(m,3H)5.14-5.76(m,4H)6.30(s,1H)6.35(s,1H)7.05(br s,1H)7.83(br 

31

s,1H)8.07(s,1H)8.22(s,1H)；P NMR(162MHz,DMSO-d6,80℃)δppm 52.85(s,1P)；ESI-MS：m/z 679.3[M+H]+。

[0384]使用类似的方案，从中间体4a2制备化合物(*S)17，钠盐(收率：从中间体4a2制备

1

时为24％)。H NMR(400MHz,氧化氘)δppm 8.39(s,1H),8.39(br s,1H),7.89(br s,1H),7.75(br s,1H),6.48(d,J＝18.7Hz,1H),6.41(d,J＝20.3Hz,1H),5.68(dd,J＝51.7,4.5Hz,1H),5.74(dd,J＝50.9,4.5Hz,1H),5.48-5.60(m,1H),5.08-5.21(m,1H),4.54(br d,J＝9.4Hz,1H),4.46(br d,J＝9.4Hz,1H),4.34(br d,J＝11.8Hz,1H),4.09(dd,J＝

31

11.2,5.1Hz,1H),3.73(dd,J＝13.8,2.4Hz,1H),3.39(br d,J＝13.4Hz,1H)；P NMR(162MHz,D2O)δppm 54.84(s,1P)；ESI-MS：m/z 679.3[M+H]+。[0385]实施例5：化合物40

[0386]

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步骤1：(注：使用前将反应溶剂在适当的干燥剂上干燥。)将中间体S1a(1.65g，

1.88mmol)和中间体A24(1.57g，2.45mmol)的无水DCE溶液(30mL)以及DMAP(1.15g，9.42mmol)的无水DCE溶液(10mL)在活化的分子筛上干燥过夜。将这两种溶液混合并在60℃下在N2下搅拌6小时。将所得反应混合物冷却至室温并用水洗涤。浓缩有机相，得到粗制中间体5a，其将直接用于下一步。[0388]步骤2：将上述中间体5a的DCM溶液(100mL)用水(169mg，9.40mmol)和DCA(1.21g，9.40mmol)处理，并在室温下搅拌2小时。将所得反应混合物用5％NaHCO3水溶液洗涤并减压浓缩。残余物通过反相快速色谱法(梯度洗脱：0％至50％MeCN的水溶液)纯化，得到中间体

1

5b(0.6g，收率：从S1a制备时为41％)。H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm)：12.11(br s,2H),11.26(s,1H),8.75(s,1H),8.65(s,1H),8.53(brs,1H),8.04(d,J＝7.2Hz,2H),7.65(t,J＝7.2Hz,1H),7.55(t,J＝7.8Hz,2H),6.44-6.40(m,2H),5.92(brs,1H),5.63(ddd,J＝1.8,3.5,52.8Hz,1H),5.27-5.25(m,1H),4.92(s,未拆分,1H),4.65-4.60(m,1H),4.19-4.17(m,1H),4.12-4.09(m,1H),3.51-3.34(m,5H),2.83-2.75(m,2H),1.12(d,J＝7.2Hz,3H),1.11(d,J＝7.2Hz,3H)；ESI-MS：m/z 773.2[M+H]+。[0389]步骤3：(注：使用前将反应溶剂在适当的干燥剂上干燥。)在N2下，将中间体5b(200mg，0.259mmol)和1H-四唑(4.6mL，0.45M MeCN溶液，2.07mmol，使用前在分子筛上干燥)的无水THF(4mL)溶液用活化的分子筛处理30分钟，之后在25分钟内滴加2-氰基乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(140mg，0.466mmol)的THF溶液(1.6mL)。将所得反应混合物搅拌2小时。加入tBuOOH(414μL的5.0M癸烷溶液，2.07mmol)，并继续搅拌30分钟。将反应混合物用DCM/MeOH溶剂混合物(10/1)稀释，并通过硅藻土垫过滤。浓缩滤液，并且残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的中间体5c(142mg，收率：62％)。ESI-MS：m/z 888.2[M+H]+。[0390]步骤4：将中间体5c(142mg，0.16mmol)在甲胺的浓乙醇溶液(10mL)中在40℃下搅拌2小时。将反应混合物减压蒸发至干。将残余物溶于水中并用DCM洗涤。冻干后获得的粗制产物通过反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，10μm，150×40mm；流动相：10mM碳酸氢铵溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，冻干后得到为白色固体的纯化合物40。通过在填装有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的转化，冻干后得到白色蓬松固体

1

(82.5mg，收率：46％)。H NMR(400MHz,D2O)：δppm 8.25-8.06(m,2H),6.55(br dd,J＝3.4,7.4Hz,1H),6.48-6.36(m,1H),5.59(br d,J＝7.8Hz,1H),5.53-5.22(m,2H),4.50(br d,J＝9.3Hz,1H),4.37(br d,J＝5.3Hz,1H),4.25-4.04(m,2H),3.85-3.72(m,1H),3.49(br d,

19

J＝12.8Hz,1H),3.43-3.29(m,1H),3.11-2.95(m,1H)；F NMR(376MHz,D2O)：δppm-198.05

31

(br s,1F)；P NMR(162MHz,D2O)：δppm-1.64(s,1P)；ESI-MS：m/z 661.0[M+H]+。[0391]化合物6、29、32、35、39、41、44和46以类似的方式从选自S1至S7以及A1至A27的适当中间体开始制备，并且分析数据示于表2中。

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实施例6：化合物9

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[0394]

步骤1：(注：使用前将反应溶剂在适当的干燥剂上干燥。)在过量的活化分子筛的

存在下，将中间体S5(7.03g，7.07mmol)和中间体A2(3.1g，4.71mmol)的无水THF溶液(100mL)搅拌30分钟。接下来，添加DMAP(2.88g，23.57mmol)，将反应混合物在45℃下搅拌12小时。将所得反应溶液冷却至室温并用EtOAc稀释，之后通过过滤除去分子筛。将滤液用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到纯的中间体6a(5.3g，收率：75％)。ESI-MS：m/z 756.7[M/2+H]+。[0396]步骤2：将中间体6a(4.4g，2.91mmol)溶于DCM(30mL)中，之后加入水(524μL，29.09mmol)和DCA(490μL在DCM(10mL)中，5.98mmol)。将反应混合物在室温下搅拌4小时，之后加入吡啶(936μL，11.64mmol)和MeOH(5mL)。将所得反应溶液减压浓缩，粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至5.3％MeOH的DCM溶液)纯化，得到中间体6b(2.2，收率：83％)。ESI-MS：m/z 908.3[M+H]+。[0397]步骤3：(注：使用前将反应溶剂在适当的干燥剂上干燥。)将中间体6b(0.60g，0.66mmol)和1H-四唑(5.79mL的3％至4％MeCN溶液，使用前在分子筛上干燥)的无水THF/MeCN溶剂混合物(1:1，100mL)溶液在N2下用活化的分子筛处理1小时，之后分批加入2-氰基乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(210μL，0.66mmol)。将反应混合物振摇2小时。加入额外量的2-氰基乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(210mg，0.66mmol)，并继

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续振摇2小时。接下来，加入tBuOOH(160μL的5.5M癸烷溶液，0.86mmol)的溶液，将反应混合物振摇过夜。加入额外量的tBuOOH(160μL的5.5M癸烷溶液，0.86mmol)，并将反应混合物再振摇一小时。通过过滤除去分子筛并用二氯甲烷冲洗。将滤液用饱和Na2S2O3水溶液和饱和NaHCO3水溶液、盐水的混合物洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱

1

法(梯度洗脱：0％至10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到中间体6c(0.12g，收率：11％)。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.12(s,1H),11.73(s,1H),11.22(s,1H),8.71(br t,J＝5.9Hz,1H),8.66(s,1H),8.63(s,1H),8.28(s,1H),8.05(d,J＝7.3Hz,2H),7.62-7.69(m,1H),7.53-7.60(m,2H),7.08(d,J＝8.8Hz,2H),6.72(d,J＝8.5Hz,2H),0.00(d,J＝5.8Hz,1H),6.19(dd,J＝14.1,3.8Hz,1H),5.55-5.58(m,1H),5.64(dt,J＝50.7,4.0Hz,1H),5.48(t,J＝4.9Hz,1H),5.14(dt,J＝12.5,4.8Hz,1H),4.72(t,J＝5.5Hz,1H),4.63(d,J＝11.5Hz,1H),4.36-4.44(m,1H),4.42(d,J＝11.5Hz,1H),4.31(br d,J＝3.0Hz,1H),4.07-4.13(m,1H),3.71-3.77(m,1H),3.67(s,3H),3.58-3.65(m,1H),3.40-3.51(m,1H),3.28-3.35(m,1H),2.75(spt,J＝6.8Hz,1H),1.11(d,J＝6.5Hz,6H)；ESI-MS：m/z 1023.5[M+H]+。[0398]步骤4：将中间体6c(0.12g，0.072mmol)在甲胺的浓乙醇溶液(10mL)中在45℃下搅拌1小时。将反应混合物减压蒸发至干。在乙腈(3mL)中研磨残余物。滤出沉淀物，用乙腈洗涤并干燥，得到中间体6d，其将原样用于下一步。ESI-MS：m/z 794.3[M-H]-。[0399]步骤5：在0℃下，将苯甲醚(0.16mL，1.48mmol)的TFA(1.13mL，14.78mmol)溶液添加到上述中间体6d中。将反应混合物在0℃下搅拌75分钟，之后用恒定的N2气流除去大部分TFA。通过在0℃下添加浓甲胺(33％的EtOH溶液，1.83mL，14.8mmol)来碱化部分浓缩的反应混合物，之后通过吹入N2将其进一步浓缩至干。在MeCN中研磨所得残余物。滤出沉淀物，并通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18OBD，10μm，150×50mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeOH(B)；梯度洗脱)纯化，冻干后得到为白色固体的纯化合物6。通过在填装有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的转化，冻干后得到白色蓬松固体

1

(30mg，收率：从中间体6c制备时为58％)。H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δppm 8.39(br s,1H),8.11(s,1H),7.90(s,1H),6.91(br s,2H),6.42(br s,2H),6.37(br s,1H),6.11(d,J＝17.1Hz,1H),5.92(d,J＝6.1Hz,1H),5.35-5.58(m,1H),5.25(br d,J＝19.1Hz,1H),4.77-4.89(m,2H),4.25-4.33(m,1H),4.07-4.19(m,2H),3.88(ddd,J＝12.2,5.9,1.8Hz,

31

1H),3.37-3.51(m,1H),3.28(br dd,J＝14.2,4.1Hz,1H)；P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm 0.92(s,1P)；ESI-MS：m/z 676.3[M+H]+。[0400]化合物7、8、11和36以类似的方式从选自S1至S7以及A1至A27的适当中间体开始制备，并且分析数据示于表2中。

[0401]

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[0402]

[0403]

实施例7：化合物(*R)14和(*S)14

[0404]

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CN 112424212 A[0405]

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步骤1：(注：使用前将反应溶剂在适当的干燥剂上干燥。)在N2下，将中间体6b

(1.0g，1.1mmol)和1H-四唑(9.65mL的3％至4％MeCN溶液，使用前在分子筛上干燥)的无水THF/MeCN溶剂混合物(1:1，160mL)溶液用活化的分子筛处理1小时。一次性加入2-氰基乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(350μL，1.1mmol)，将反应混合物振摇2小时。加入额外量的2-氰基乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(350μL，1.1mmol)，并继续振摇2小时。加入PADS(0.67g，2.2mmol)，并将反应混合物振摇18小时。通过过滤除去分子筛并用二氯甲烷冲洗。将滤液用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到为P-表异构体混合物的中间体7a。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至10％MeOH的DCM溶液)分离两种异构体，得到作为第一洗脱异构体的中间体xa1(0.175g，收率：11％，纯度：71％)和作为第二洗脱异构体的中间体7a2(0.278g，收率：19％，纯度：79％)。中间体7a1：ESI-MS:m/z 1039.4[M+H]+；中间体7a2：ESI-MS:m/z 1039.5[M+H]+。[0406]步骤2：将中间体7a1(0.175g，0.12mmol)在甲胺的浓乙醇溶液(10mL)中在45℃下搅拌1小时。将反应混合物减压蒸发至干。在MeCN(3mL)中研磨残余物。通过过滤分离沉淀物并干燥，得到中间体7b1，其将原样用于下一步。ESI-MS：m/z 812.4[M+H]+。使用类似的方案，从中间体7a2制备中间体7b2。ESI-MS：m/z 812.4[M+H]+。[0407]步骤3：在0℃下，将苯甲醚(0.13mL，1.19mmol)的TFA(0.91mL，11.8mmol)溶液添加到上述中间体7b1(147mg，0.15mmol)中。将反应混合物在0℃下搅拌75分钟，之后用恒定的N2气流除去大部分TFA。通过在0℃下添加甲胺(33％的EtOH溶液，1.47mL，11.8mmol)来碱化部分浓缩的反应混合物，之后通过吹入N2将其进一步浓缩至干。在MeCN中研磨所得残余物。通过过滤分离沉淀物，并通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，10μm，150×50mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeOH(B)；梯度洗脱)纯化，得到为白色固体的纯的化合物(*R)14。通过在填装有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的

1

转化，冻干后得到白色蓬松固体(5mg，收率：从7a1制备时为6％)。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.65(br s,1H),8.77(br s,1H),8.13(s,1H),7.97(s,1H),7.19(br s,2H),6.60(br s,2H),6.05(m,J＝16.7Hz,2H),5.87(d,J＝5.7Hz,1H),5.09-5.37(m,1H),4.99(m,J＝9.2,4.7Hz,2H),4.55-4.74(m,1H),4.22(m,J＝12.2Hz,2H),3.92-4.01(m,1H),3.64-3.76(m,

31

1H)；P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm 55.98(s,1P)；ESI-MS：m/z 692.1[M+H]+。[0408]使用类似的方案，从中间体7b2制备化合物(*S)14，钠盐(收率：从中间体7a2制备

1

时为20％)。H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δppm 8.44(br s,1H),8.11(s,1H),8.00(s,1H),6.93(br s,2H),6.33(br s,2H),6.12(d,J＝17.5Hz,1H),5.95(d,J＝4.9Hz,1H),0.00(br d,J＝52.5Hz,1H),5.14-5.28(m,1H),5.10(dt,J＝11.7,4.7Hz,1H),4.82-4.93(m,2H),4.29(br d,J＝6.5Hz,1H),4.22(dt,J＝12.2,3.7Hz,1H),4.13-4.19(m,1H),3.87(ddd,J＝

31

11.8,5.3,2.0Hz,1H),3.40-3.55(m,1H),3.27(dd,J＝14.0,3.1Hz,1H)；P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm 53.23(s,1P)；ESI-MS：m/z 692.1[M+H]+。[0409]化合物(*R)12、(*S)19和(*R)19以类似的方式，从选自S1至S7以及A1至A27的适当中间体开始制备，并且分析数据示于表2中。

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[0410]

[0411]

实施例8：化合物13

[0412]

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步骤1：(注：使用前将反应溶剂在适当的干燥剂上干燥。)在过量的活化分子筛存

在下，将氨基磺酸盐S2(3.0g，3.50mmol)和醇A1(1.82g，2.69mmol)的无水THF(50mL)溶液搅拌30分钟。接下来，添加DMAP(1.64g，13.45mmol)，将反应混合物在45℃下搅拌18小时。将所得反应溶液冷却至室温，并通过硅藻土垫过滤。浓缩滤液，将所得残余物重新溶于EtOAc，用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到中间体8a(3.06g，收率：81％)。ESI-MS：m/z 1394.7[M+H]+。[0414]步骤2：将中间体8a(3.06g，2.19mmol)溶于DCM(100mL)中，之后加入水(395μL，21.94mmol)和DCA(566mg，4.39mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，之后加入吡啶(707μL，8.77mmol)和MeOH。将所得反应溶液减压浓缩，粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：

1

0％至5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到中间体8b(1.44，收率：83％)。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.13(s,1H),11.60(s,1H),11.27(s,1H),8.76(s,1H),8.70(s,1H),8.68(br t,J＝6.0Hz,1H),8.19(s,1H),8.05(d,J＝7.3Hz,2H),7.63-7.68(m,1H),7.56(t,J＝7.7Hz,2H),6.48(dd,J＝16.4,2.9Hz,1H),6.16(dd,J＝18.7,2.1Hz,1H),5.88(dm,J＝51.4Hz,1H),5.87(d,J＝6.3Hz,1H),5.31-5.47(m,3H),4.40-4.51(m,1H),4.30-4.35(m,1H),4.02-4.09(m,1H),3.74-3.82(m,1H),3.57-3.67(m,1H),3.51(dd,1H),3.38-3.43(m,1H),2.77(spt,J＝6.8Hz,1H),1.12(d,J＝6.8Hz,3H),1.13(d,J＝6.8Hz,3H)；ESI-MS：m/z 790.3[M+H]+。[0415]步骤3：(注：使用前将反应溶剂在适当的干燥剂上干燥。)在N2下，将中间体8b(200mg，0.253mmol)和1H-四唑(4.5mL的0.45M MeCN溶液，使用前在活化的分子筛上干燥)的无水THF/MeCN(1:1，10mL)溶液用活化的分子筛处理30分钟。接下来，滴加2-氰基乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)-亚磷酰二胺(121mg，0.405mmol)的MeCN(3.9mL)溶液，将所得反应混合物搅拌3小时。加入tBuOOH(253μL的5.5M癸烷溶液，1.39mmol)溶液，并继续搅拌35分钟。将反应混合物用DCM稀释并通过硅藻土垫过滤。将滤液减压浓缩。以相同的规模重复相同的反应程序。合并来自两个反应的粗制产物，用于通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至6％MeOH的DCM溶液)纯化，得到中间体8c(248mg，收率：54％)。ESI-MS：m/z 905.3[M+H]+。[0416]步骤4：将中间体8c(220mg，0.243mmol)在甲胺的浓乙醇(20mL)溶液中在约45℃下搅拌直至完全转化(约2小时)。将反应混合物减压蒸发至干。残余物通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，10μm，150mm×30mm；流动相：10mM碳酸氢铵溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，冻干后得到为白色固体的纯化合物13。通过在填装有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的转化，冻干后得到白色蓬松固体(124mg，收率：73％)1。H NMR(400MHz,D2O)δ＝7.96(br,s,1H),7.93(s,1H),7.71(s,1H),6.08-5.59(m,5H),5.17-5.11(m,1H),4.68(br,d,J＝8.8Hz,1H),4.51(br,d,J＝11.3Hz,2H),4.19(br,dd,J＝

19

5.6,11.9Hz,1H),3.81(d,J＝12.0Hz,1H),3.50(d,J＝13.6Hz,1H)；F NMR(376MHz,D2O)δ

31

＝-201.43(s,1F),-200.81(s,1F)；P NMR(162MHz,D2O)δ＝-1.44(s,1P)；ESI-MS：m/z 678.1[M+H]+。

[0417]化合物10、25和27以类似的方式从选自S1至S7以及A1至A27的适当中间体开始制备，并且分析数据示于表2中。

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[0418]

[0419]

实施例9：化合物24

[0420]

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步骤1：(注：使用前将反应溶剂在适当的干燥剂上干燥。)向反应烧瓶中装入DMAP

(1.77g，14.5mmol)、无水DCE(9.7mL)和活化的分子筛。将所得混合物在惰性气氛下振摇2小时。同时，将分别在无水DCE(2×9.7mL)中的醇A1(1.94g，2.88mmol)和氨基磺酸盐S3(2.44g，3.16mmol)溶液在活化的分子筛上干燥(约2小时)。将两种溶液相继转移到反应烧瓶中。将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。通过过滤除去分子筛并用DCM充分冲洗。用饱和NaHCO3水溶液洗涤滤液，用DCM萃取水相。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：1至4％MeOH的DCM溶液)纯化，得到纯的中间体9a(2.27g，收率：55％)。ESI-MS：m/z 1310.5[M+H]+。[0422]步骤2：将中间体9a(2.27g，1.73mmol)溶于DCM(87mL)中，然后加入水(160μL，8.65mmol)和DCA(560μL，6.76mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时，之后加入吡啶(700μL，8.65mmol)和MeOH。将所得反应溶液部分地减压浓缩，并转移到硅胶柱以进行纯化(梯度

1

洗脱：5％至15％MeOH的DCM溶液)，得到中间体9b(1.19g，收率：97.5％)。H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 12.39-12.55(m,1H),11.26(s,1H),8.76(s,1H),8.70(s,1H),8.67(br s,1H),8.28(s,1H),8.02-8.09(m,3H),7.66(t,J＝7.3Hz,1H),7.56(t,J＝7.3Hz,2H),6.48(dd,J＝16.7,2.6Hz,1H),6.25(dd,J＝19.0,2.1Hz,1H),5.90(d,J＝5.9Hz,1H),5.88(dm,J＝51.6Hz,1H),5.30-5.59(m,3H),4.39-4.56(m,1H),4.32(br s,1H),4.01-4.11(m,1H),3.72-3.84(m,1H),3.56-3.69(m,1H),3.44-3.55(m,1H)；ESI-MS：m/z 728.0[M+Na]+。[0423]步骤3：(注：使用前将反应溶剂在适当的干燥剂上干燥。)在N2下，将中间体9b(200mg，0.284mmol)和1H-四唑(5.05mL的0.45M MeCN溶液，使用前在活化的分子筛上干燥)的无水DMF/MeCN(1:3，4mL)溶液用活化的分子筛处理30分钟。接下来，滴加2-氰基乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(154mg，0.511mmol)的THF(2mL)溶液，将所得反应混合物搅拌2小时。接下来，加入tBuOOH(454μL的5M癸烷溶液，2.27mmol)的溶液，并继续搅拌30分钟。通过过滤除去分子筛，将滤液减压浓缩并转移到硅胶柱以进行纯化(梯度洗脱：0％至10％MeOH的DCM溶液)，得到粗制制中间体9c(175mg，收率：75％)。ESI-MS：m/z 820.3[M+H]+。

[0424]步骤4：将中间体9c(175mg，0.214mmol)在甲胺的浓乙醇溶液(5mL)中在约40℃下搅拌直至完全转化(约2.5小时)。将反应混合物减压蒸发至干。将残余物溶于水中并用DCM洗涤。将水层冻干，所得残余物通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，150mm×30mm；流动相：10mM碳酸氢铵溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，冻干后得到为白色固体的纯化合物24。通过在填装有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的转

1

化，冻干后得到白色蓬松固体(50mg，收率：34％)。H NMR(400MHz,D2O)δppm 7.98(s,1H),7.86(s,1H),7.66(s,1H),6.04-6.23(m,2H),5.72(br d,J＝51.8Hz,1H),5.39-5.52(m,1H),5.46(dd,J＝50.4,2.5Hz,1H),4.86-5.05(m,1H),4.56(br d,J＝9.3Hz,1H),4.32-4.48(m,2H),4.07(br dd,J＝11.9,5.4Hz,1H),3.69(dd,J＝13.3,2.5Hz,1H),3.41(br d,J

31

＝13.1Hz,1H)；P NMR(162MHz,D2O)δppm-1.82(s,1P)；ESI-MS：m/z 663.2[M+H]+。[0425]化合物4、23、26、33、38、42、43、45和61以类似的方式从选自S1至S7以及A1至A28的适当中间体开始制备，并且分析数据示于表2中。

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实施例10：化合物(*R)37和(*S)37

[0429]

[0430]

步骤1：在N2下，将中间体1e(2.9g，3.3mmol)、中间体A9(1.5g，2.2mmol)和活化的

分子筛在无水THF(25mL，经Na/二苯甲酮新鲜蒸馏)中的混合物在室温下搅拌30分钟。加入

[0431]

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DMAP(1.34g，10.9mmol)，并在40℃下继续搅拌12小时。将反应溶液冷却至室温，之后用DCM稀释并通过硅藻土垫过滤。将滤液减压浓缩。在通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至2％MeOH的DCM溶液)纯化两轮后，获得为白色固体的中间体10a(收率：58％)。ESI-MS：m/z 712.7[[M+2H]/2]+。[0432]步骤2：将中间体10a(1.0g，0.7mmol)溶于DCM(10mL)中，然后加入水(127mg，7.0mmol)和DCA(181mg，1.41mmol)(观察到形成胶状残余物)。将反应溶液在室温下搅拌过夜。加入MeOH(7mL)和吡啶(222mg，2.81mmol)，将所得悬浮液搅拌15分钟。通过过滤分离沉淀物并用DCM洗涤。部分地减压浓缩滤液，得到第二批沉淀物，通过过滤收集沉淀物并用DCM

1

洗涤。将两种沉淀物都溶于水中并冻干，得到为白色固体的化合物10b(收率：83％)。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.24(s,2H),8.76(s,1H),8.75(s,1H),8.70(t,J＝6.1Hz,1H),8.63(s,1H),8.53(s,1H),8.01-8.07(m,4H),7.61-7.68(m,2H),7.52-7.61(m,4H),6.39(dd,J＝19.4,1.9Hz,1H),6.21(s,1H),5.93(d,J＝6.3Hz,1H),5.62(ddd,J＝52.6,4.4,2.0Hz,1H),5.32(t,J＝5.9Hz,1H),5.07(s,1H),5.01(s,1H),4.56-4.66(m,1H),4.02-4.09(m,1H),3.99(d,J＝8.5Hz,1H),3.95(d,J＝8.5Hz,1H),3.83-3.89(m,2H),3.45-3.52(m,1H),3.26-3.31(m,1H),2.53-2.58(m,1H)。ESI-MS：m/z 818.3[M+H]+。[0433]步骤3：在0℃下冷却中间体10b(100mg，0.122mmol)和DBU(279mg，1.83mmol)的DMF(10mL)溶液。在25分钟内加入(–)-PSI试剂((2S,3aS,6R,7aS)-3a-甲基-2-((全氟苯基)硫代)-6-(丙-1-烯-2-基)六氢苯并[d][1,3,2]氧杂硫杂磷唑2-硫化物，CAS：102691-36-1，82mg，0.18mmol的2mL DMF溶液)。将反应混合物在10℃下搅拌2.5小时，之后一次性加入额外量的(–)-PSI试剂(40mg，0.089mmol)，继续搅拌过夜。额外量的(–)-PSI试剂(80mg，0.18mmol)和12小时的搅拌是以实现完全转化(观察到2/3比例的P-异构体)所必需的。减压除去溶剂，得到黄色胶状物，其通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，150mm×30mm；流动相：10mM碳酸氢铵溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到作为第一洗脱异构体的中间体10c1(40mg，收率：20％，纯度：78％)和作为第二洗脱异构体的中间体10c2(23mg，收率：11.5％，纯度：68％)。(注：根据文献，预期P(R)-异构体为主要异构体。)中间体10c1：ESI-MS:m/z 896.2[M+H]+；中间体10c2：ESI-MS:m/z 896.2[M+H]+。[0434]步骤4：在室温下，将中间体10c1(40mg，0.045mmol)在甲胺的浓乙醇溶液中搅拌直至完全转化(约2小时)。将反应混合物减压蒸发至干，并将残余物溶于水中。水溶液用DCM洗涤并冻干，所得粗制产物通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，150mm×30mm；流动相：10mM碳酸氢铵溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物(*R)37。通过在填装有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向对应钠盐的最终转化，冻干后得

1

到白色蓬松固体(29mg，收率：从10c制备时为30％)。H NMR(400MHz,D2O)：8.63(s,1H),8.26(d,J＝2.8Hz,2H),7.15(s,1H),6.63-6.45(m,1H),6.23(s,1H),5.95-5.68(m,1H),5.29-4.99(m,3H),4.70-4.54(m,2H),4.38(dd,J＝4.1,12.2Hz,1H),4.31-4.15(m,2H),3.88(dd,

19

J＝2.6,12.9Hz,1H),3.70(br d,J＝13.1Hz,1H)；F NMR(376MHz,氧化氘)：-196.62(br s,

31

1F)；P NMR(162MHz,D2O)：54.30(s,1P)；ESI-MS：m/z 688.0[M+H]+。[0435]使用类似的方案，从中间体10c2制备化合物(*S)37钠盐(收率：从中间体10c制备

1

时为15％)。H NMR(400MHz,D2O)：8.06-7.81(m,3H),6.83(s,1H),6.34-6.17(m,1H),5.93(s,1H),5.39-5.15(m,1H),4.96-4.75(m,3H),4.33(br d,J＝11.5Hz,2H),4.13(dd,J＝

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7.3,12.0Hz,1H),4.01(s,2H),3.63(br dd,J＝2.5,13.1Hz,1H),3.47(br d,J＝12.8Hz,

1931

1H)；F NMR(376MHz,D2O)：-196.37(br s,1F)；P NMR(162MHz,D2O)：54.18(s,1P)；ESI-MS：m/z 688.0[M+H]+。[0436]实施例11：化合物30

[0437]

步骤1：在N2下，将中间体S1a(741mg，0.846mmol)、中间体A13(500mg，0.651mmol)和分子筛在DCE(20mL)中的混合物在室温下搅拌30分钟。加入DMAP(398mg，3.26mmol)，并在55℃下继续搅拌12小时。将反应溶液冷却至室温并过滤。将滤液用DCM稀释，用盐水和饱和NaHCO3水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至5％MeOH的DCM溶液)，然后进行制备型反相HPLC(固定相：Phenomenex Synergi Max-RP，10μm，250mm×50mm；流动相：水(A)–MeCN(B)，梯度洗脱)纯化，得到为白色固体的中间体11a(收率：45％)。ESI-MS：m/z 753.2[(M+2H)/2]+。[0439]步骤2：用水(86mg，4.79mmol)和DCA(123mg，0.96mmol)处理中间体11a(800mg，0.48mmol)的DCM(20mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌直至完全转化(约5小时)。加入MeOH(5mL)和吡啶(378mg，4.79mmol)，并再继续搅拌2小时。接下来，将溶液压力浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至8％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的中间

1

体11b(收率：81％)。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.05(s,1H),11.78(s,1H),11.26(s,1H),8.77(s,1H),8.66(s,1H),8.57(br d,J＝4.3Hz,1H),8.24-8.20(m,1H),8.02(br d,J

101

[0438]

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＝7.5Hz,2H),7.69-7.60(m,1H),7.56-7.52(m,1H),7.38(dd,J＝5.8,7.5Hz,1H),6.53-6.33(m,1H),6.06-5.89(m,1H),5.72-5.54(m,1H),5.05(br s,1H),4.80-4.72(m,1H),4.71-4.60(m,1H),4.55(d,J＝4.8Hz,1H),4.39(dd,J＝4.8,10.0Hz,1H),4.13-4.06(m,1H),3.57-3.46(m,1H),3.31-3.24(m,1H),3.17(s,1H),2.77(sept,J＝6.8Hz,1H),2.42-2.30(m,1H),2.21(td,J＝9.2,12.8Hz,1H),1.86-1.74(m,1H),1.11(d,J＝6.9Hz,6H),1.09(s,3H),0.60(s,9H),-0.12(s,3H),-0.43(s,3H)；ESI-MS：m/z 900.5[M+H]+。[0440]步骤3：(注：使用前将反应溶剂在适当的干燥剂上干燥。)在N2下，将中间体11b(200mg，0.222mmol)的THF(4mL)溶液用活化的分子筛处理20分钟。接下来，加入1H-四唑(3.95mL的0.45M MeCN溶液，1.78mmol)的溶液，然后加入2-氰基乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(134mg，0.444mmol)的THF(1mL)溶液。将所得反应混合物搅拌1.5小时。接下来，加入tBuOOH(204μL的5.5M癸烷溶液，1.12mmol)的溶液，并继续搅拌1.5小时。通过过滤除去分子筛，将滤液减压浓缩并转移到硅胶柱以进行纯化(梯度洗脱：0％至15％MeOH的DCM溶液)，得到中间体11c(151mg，收率：54％)。ESI-MS：m/z 1015.4[M+H]+。[0441]步骤4：将中间体11c(151mg，0.149mmol)在甲胺的浓乙醇溶液(5mL)中在45℃下搅拌直至完全转化。将反应混合物压力浓缩。残余物通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，10μm，150mm×30mm；流动相：10mM碳酸氢铵溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到中间体11d(55mg，收率：45％)。ESI-MS：m/z＝788.1[M+H]+。[0442]步骤5：将向其中加入Et3N(424mg，4.19mmol)和Et3N.3HF(337mg，2.09mmol)的中间体11d(55mg，0.070mmol)的吡啶(1.5mL)溶液在50℃下搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温，加入THF(3mL)和异丙氧基三甲基硅烷(831mg，6.28mmol)，并继续搅拌2小时。减压除去溶剂，将所得残余物通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，10μm，150mm×30mm；流动相：10mM碳酸氢铵溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物30。通过在填装有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向对应钠盐的最终转化，冻干后得到白色蓬

1

松固体(18mg，收率：从11d制备时为37％)。H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.61(br s,1H),8.24(s,1H),8.13(br s,1H),6.91-6.77(m,1H),5.84-5.64(m,1H),5.63-5.51(m,1H),5.47(br s,1H),5.11(br d,J＝6.8Hz,1H),4.89(br d,J＝9.5Hz,2H),4.53-4.41(m,2H),4.16(br 

19

d,J＝12.0Hz,1H),3.96(br d,J＝13.2Hz,1H),3.06(br s,2H),2.88-2.74(m,1H)；F NMR

31

(376MHz,D2O)δppm-195.112(s,1F)；P NMR(162MHz,D2O)δppm 0.931(s,1P)；ESI-MS：m/z 674.1[M+H]+。

[0443]化合物48以类似的方式从A19和S1a开始制备，并且分析数据示于表2中。

[0444]

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CN 112424212 A[0445]

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实施例12：化合物28

[0446]

步骤1：(注：使用前将反应溶剂在适当的干燥剂上干燥。)向反应烧瓶中装入DMAP

(2.44g，20mmol)、无水DCE(11mL)和活化的分子筛。将所得混合物在室温下于惰性气氛下搅拌2小时。同时，将分别在无水DCE(2×11mL)中的中间体A26a(2.50g，4.40mmol)的溶液和中间体S7(2.68g，4.0mmol)的溶液在活化的分子筛上干燥(约2小时)。将两种溶液相继转移到反应烧瓶中。将所得反应混合物搅拌过夜。通过过滤除去分子筛并用DCM充分冲洗。用饱和NaHCO3水溶液洗涤滤液，用DCM萃取水相。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：1％至5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到纯的中间体12a(3.45g，收率：78％)。ESI-MS：m/z 1103.4[M+H]+。[0448]步骤2：将向其中加入Et3N(21.2mL，153mmol)和Et3N.3HF(4.95mL，30.4mmol)的中间体12a(3.35g，3.04mmol)的吡啶(60.8mL)溶液在45℃下搅拌，直至完全转化(约1.5小时)。将反应混合物冷却至室温，加入异丙氧基三甲基硅烷(32.4mL，182.4mmol)，并继续搅拌2小时。减压除去溶剂，所得残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至4％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为黄色固体的中间体12b(1.41g，收率：47％)。ESI-MS：m/z 989.1[M+H]+。[0449]步骤3：将中间体12b(1.41g，1.43mmol)溶于DCM(71.5mL)中，然后加入H2O(130μL，7.49mmol)和DCA(833mg，6.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌直至完全转化(约1小时)。

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[0447]

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在搅拌下加入吡啶(0.58mL，7.15mmol)和MeOH(27mL)。将混合物部分地浓缩并转移到硅胶柱以进行纯化(梯度洗脱：10％至18％MeOH的DCM溶液)，得到纯中间体12c(0.46g，收率：

1

46％)。H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 12.47(br s,1H),11.21(s,1H),8.74(s,1H),8.70(br d,J＝7.6Hz,1H),8.65(s,1H),8.20(s,1H),8.03-8.09(m,3H),7.62-7.68(m,1H),7.53-7.59(m,2H),6.47(t,J＝6.4Hz,1H),6.26(d,J＝19.3Hz,1H),6.01(d,J＝6.4Hz,1H),5.43(dd,J＝52.5,3.2Hz,1H),5.10(t,J＝5.3Hz,1H),4.50-4.67(m,1H),4.40-4.50(m,1H),4.15-4.33(m,3H),3.92-3.97(m,1H),3.54-3.61(m,1H),3.40-3.52(m,1H),2.77-2.92(m,1H),2.41-2.60(m,1H)；ESI-MS：m/z 687.2[M+H]+。[0450]步骤4：(注：使用前将反应溶剂在适当的干燥剂上干燥。)向中间体12c(200mg，0.291mmol)的无水DMF(4mL)溶液中加入分子筛和1H-四唑(5.1mL的0.45M MeCN溶液，在使用前在分子筛上干燥)。在N2下，将所得异质混合物搅拌30分钟。接下来，在35分钟内滴加2-氰基乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺的无水MeCN(158mg的1.5mL MeCN溶液，0.52mmol)溶液，之后将反应混合物在室温下再搅拌2小时。接下来，加入tBuOOH的溶液(466μL的5.0M癸烷溶液，2.33mmol)并继续搅拌30分钟。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并真空浓缩。所得残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至16％MeOH的DCM溶液)纯化，得到中间体12d(145mg，收率：62％)。ESI-MS：m/z 802.3[M+H]+。[0451]步骤5：在室温下，将中间体12d(145mg，0.18mmol)在甲胺的浓乙醇溶液中搅拌直至完全转化(约2小时)。将反应混合物减压蒸发至干，之后将残余物溶于水中。用DCM洗涤所得水溶液并冻干。粗制产物通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，150mm×30mm；流动相：10mM碳酸氢铵溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，冻干后得到为白色固体的化合物28。通过在填装有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转

1

化，冻干后得到白色蓬松固体(41mg，收率：从12d制备时为35％)。H NMR(400MHz,D2O)：δppm 8.05(s,1H),7.85(s,1H),7.65(s,1H),7.47(s,1H),6.12-5.97(m,2H),5.91-5.67(m,1H),5.31-5.09(m,1H),4.58(d,J＝9.0Hz,1H),4.48-4.29(m,3H),4.28-4.18(m,1H),4.03(dd,J

19

＝6.0,11.8Hz,1H),3.07(dd,J＝7.0,13.8Hz,1H),2.51(ddd,J＝6.8,10.9,13.7Hz,1H)；F 

31

NMR(376MHz,D2O)δppm-204.12(s,1F)；P NMR(162MHz,D2O)δppm-2.00(s,1P)；ESI-MS：m/z 645.1[M+H]+。

[0452]化合物21以类似的方式从中间体S6和A27开始制备，并且分析数据示于表2中。

[0453]

[0454]

实施例13：化合物47

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[0455]

步骤1：(注：使用前将反应溶剂在适当的干燥剂上干燥。)在N2下，将中间体S1a

(3.29g，3.77mmol)和中间体1b(1.00g，2.51mmol)在无水DCE(70mL)中的混合物用活化的分子筛处理，并且在室温下搅拌30分钟。加入DMAP(1.23g，10.04mmol)，并将所得悬浮液在50℃下搅拌3小时。通过硅藻土垫过滤除去分子筛，并将滤液减压浓缩。将所得残余物溶于DCM中，并用饱和NH4Cl水溶液和NaHCO3洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至100％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到中间体13a(1.14g，收率：40％)。ESI-MS：m/z 1136.4[M+H]+。[0457]步骤2：将中间体13a(1.3g，1.15mmol)的THF(70mL)溶液在Pd/C(10％，3.65g，3.44mmol)上于15psi下氢化2小时。通过硅藻土垫过滤除去催化剂，并用THF/MeOH(10/1)冲

[0456]

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洗。减压浓缩滤液，得到中间体13b(835mg)。粗制产物无需纯化即可用于下一步。ESI-MS：m/z 1110.1[M+H]+。[0458]步骤3：在N2下，将上述中间体13b(835mg)、4-硝基苯酚(628mg，4.52mmol)和Et3N(1.25mL，9.03mmol)在DCE(20mL)中的混合物用活化的分子筛处理，并搅拌2小时。将反应混合物冷却至–40℃，之后加入4-硝基苯基氯硫酸盐(1.07g，4.52mmol)的DCE(5mL)溶液。然后将反应混合物缓慢温热至室温并再搅拌2小时。接下来，将反应溶液用DCM稀释，过滤并浓缩。将残余物重新溶于DCM中，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％至10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到中间体13c(490mg，不纯)。ESI-MS：m/z 1310.2[M+H]+。[0459]步骤4：将三乙基硅烷(130mg，1.122mmol)和DCA(28mg，0.224mmol)加入上述中间体13c(490mg)的DCM(15mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌12小时，之后减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到中间体13d(227mg，收率：从中间体13a制备时为20％)。ESI-MS：m/z 1008.1[M+H]+。[0460]步骤5：将中间体13d(227mg，0.225mmol)的DCM/DMF溶剂混合物(75/25，13mL)溶液用活化的分子筛处理，并在室温下搅拌1小时。加入DMAP(138mg，1.13mmol)，并将所得反应溶液在室温下搅拌2天。通过过滤除去分子筛并用DCM冲洗。将滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到中间体13e(50mg，收率：25％)。ESI-MS：m/z 869.1[M+H]+。[0461]步骤6：将中间体13e(55mg，0.063mmol)在甲胺的浓乙醇溶液(5mL)中在室温下搅拌90分钟。将所得反应混合物减压蒸发至干。将残余物溶于水中并用DCM洗涤。冻干后获得的粗制产物通过反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，10μm，150×40mm；流动相：10mM碳酸

1

氢铵溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物46(6.9mg，收率，16％)。H NMR(400MHz,D2O/CD3CN 1/1)δppm 8.77(br s,2H),8.25(br s,2H),7.07(br d,J＝21.8Hz,2H),6.30-6.47(m,2H),6.20(br d,J＝52.2Hz,2H),5.22(br d,J＝9.0Hz,2H),4.42(br d,

19

J＝13.1Hz,2H),4.15(br d,J＝13.3Hz,2H)；F NMR(376MHz,D2O/CD3CN 1/1)δppm-196.05(br s,2F)；ESI-MS：m/z 661.2[M+H]+。

[0462]下文所述的4-硝基苯基-氨基磺酸盐衍生的核苷用作代表如上文所定义的式VI、XVI、XXIV和XXXII的示例的中间体。这些可以通过实施例1(S1a＝1e)、实施例3(S1b＝3e)和实施例14至19中所述的方法合成。

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[0463]

[0464]

[0465]

实施例14：中间体S2的合成

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[0466]

步骤1：在0℃下，将CBr4(14.0g，42.22mmol)分批加入2'-氟-N2-异丁酰基-2'-脱

氧鸟苷(14a，10.0g，28.14mmol，CAS：80681-25-0)、三甲基膦(11.07g，42.22mmol)、TBAI(2.08g，5.63mmol)和NaN3(7.38g，113.52mmol)在DMF(100mL)中的搅拌悬浮液中。将反应混合物在室温下搅拌2小时，之后在35℃下搅拌48小时。接下来，将反应混合物冷却至室温，倒入饱和NaHCO3水溶液(500mL)中，并依次用EtOAc(3次)、2-Me-THF(2次)和DCM/MeOH(10:1，3次)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。所得残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色泡沫的中间体14b(8.26g，收率：77％)。ESI-MS：m/z 381.1[M+H]+。[0468]步骤2：将向其中加入DMAP(1.12g，9.20mmol)和DMTrCl(12.47g，36.81mmol)的中间体14b(7.0g，18.405mmol)的无水吡啶(70mL)溶液在80℃下搅拌15小时。将反应混合物减压浓缩。将残余物重新溶于EtOAc中，将所得有机相用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发。粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至80％EtOAc/DCM 1/1的石油醚溶液)纯化，得到为黄色泡沫的中间体14c(10.1g，收率：80％)。ESI-MS：m/z 683.3[M+H]+。[0469]步骤3：将三苯基膦(5.65g，21.53mmol)添加到中间体14c(10.5g，15.38mmol)的THF(100mL)溶液中。在N2下，将反应混合物在55℃下搅拌2小时。加入水(50mL)，并在55℃下继续搅拌12小时。将反应溶液减压浓缩。所得残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至10％MeOH的DCM溶液)进一步纯化，得到为白色泡沫的化合物14d(8.36g，收率：83％)。ESI-MS：m/z 657.1[M+H]+。[0470]步骤4：将中间体14d(4g，6.09mmol)、4-硝基苯酚(2.54g，18.27mmol)和Et3N(3.7g，36.55mmol)溶于无水DCM(150mL)中，之后加入活化的分子筛。在N2下，将所得混合物冷却至–78℃。加入4-硝基苯基氯硫酸盐(4.34g，18.27mmol)的无水DCM(50mL)溶液，之后使反应混合物在1.5小时内温热至室温。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液转移到分液

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漏斗，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶柱

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色谱法(梯度洗脱：10％至100％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到中间体S2(收率：79％)。H NMR(400MHz,CD3CN)δppm 11.76-12.13(m,1H),9.05(s,1H),8.12-8.22(m,2H),7.73(s,1H),7.50-7.57(m,2H),7.29-7.44(m,8H),7.22-7.29(m,1H),7.06(dd,J＝7.0,4.0Hz,1H),6.81-6.90(m,4H),6.12(dd,J＝14.3,5.0Hz,1H),4.97(dt,J＝50.9,5.2Hz,1H),4.36-4.43(m,1H),3.84-3.89(m,1H),3.75(s,3H),3.74(s,3H),3.23(dt,J＝14.2,3.3Hz,1H),2.98(ddd,J＝13.9,7.4,5.0Hz,1H),2.55(spt,J＝6.9Hz,1H),1.16(d,J＝6.8Hz,3H),1.14(d,J

19

＝6.8Hz,3H)；F NMR(376MHz,CD3CN)δ＝-204.23(s,1F)；ESI-MS：m/z 858.2[M+H]+。[0471]实施例15：中间体S3的合成

[0472]

步骤1：将三苯基膦(10.6g，40.4mmol)和咪唑(3.64g，53.5mmol)添加到N-苯甲酰基-2'-脱氧-2'-氟-腺苷(1a，10g，26.8mmol)的无水吡啶(99mL)溶液中。将混合物冷却至5℃，之后添加碘(10.2g，40.2mmol)，将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。在搅拌下将反应混合物倒入饱和NaHCO3水溶液(100mL)中，之后添加DCM(150mL)。将所得混合物在室温下再搅拌一小时。通过过滤分离沉淀物，用MeCN和DCM洗涤，并在高真空下干燥过夜，得到为浅黄色固体的中间体15a(10.25g，79.2％收率)。ESI-MS：m/z 506.3[M+Na]+。[0474]步骤2：将叠氮化钠(4.14g，63.6mmol)添加到中间体15a(10.25g，21.2mmol)的无水DMF(53mL)溶液中，将反应混合物在85℃下搅拌4小时。将混合物倒入水(600mL)中并搅拌

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[0473]

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30分钟。通过过滤分离沉淀物，用水洗涤(3次)，并在高真空下干燥过夜，得到为浅黄色固体的中间体1b(5.72g，收率：68％)。ESI-MS：m/z 399.3[M+H]+。[0475]步骤3：将中间体1b(5.72g，14.4mmol)在氨水(158mL)和乙醇(36mL)的混合物中的溶液在室温下搅拌过夜。减压浓缩反应混合物，并将粗制产物与MeCN(3次)共蒸发，并在高真空下干燥过夜。将获得的白色固体溶于THF(72mL)中，之后添加PPh3(5.67g，21.6mmol)和水(1.04mL，57.6mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。过滤沉淀物，用THF(3次)洗涤，并在高真空下干燥，得到中间体15b，为白色固体(3.40g，收率：88％)。ESI-MS：m/z 269.4[M+H]+。[0476]步骤4：将中间体15b(3.20g，11.9mmol)溶于蒸馏水(59.5ml)中，之后添加腺嘌呤脱氨酶(40单位/mL，8.03mL，321.3单位)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。反应完成后，将混合物浓缩并添加MeCN水溶液(5％)。对残余物进行超声处理，通过过滤分离沉淀物，用MeCN水溶液(10％)洗涤(3次)，并在高真空下干燥，得到为白色固体的中间体15c(2.98g，收率：93％)。ESI-MS：m/z 292.3[M+Na]+。[0477]步骤5：将三氟乙酸乙酯(3.27mL，27.5mmol)添加到中间体15c(2.98g，11.1mmol)在EtOH(56mL)中的悬浮液中，之后添加TEA(1.55mL，11.1mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌过夜，之后浓缩至干。将所得残余物溶于7％MeOH的DCM溶液(50mL)中，并超声处理10分钟。通过过滤分离固体，用MeCN水溶液(5％)洗涤(3次)，并在高真空下干燥过夜，得到为白色固体的中间体15d(3.58g，88％收率)。ESI-MS：m/z 388.3[M+Na]+。[0478]步骤6：在大量活化的分子筛的存在下，将中间体15d(3.58g，9.80mmol)在DMF(32.7mL)和吡啶(16.3mL)的混合物中的溶液在室温下搅拌1小时。以2小时的时间间隔分两部分(6.64g+1.66g，19.6mmol+4.9mmol)添加DMTrCl(6.64g，19.6mmol)，之后将反应混合物加热至40℃并搅拌2小时。接下来，将反应混合物冷却至室温，通过添加MeOH(10mL)淬灭并倒入水(200mL)中。用DCM和EtOAc进行萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：2％至7％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为黄色固体的中间体15e(6.79g，收率：>99％，存在残留的DMF)。ESI-MS：m/z 668.7[M+H]+。[0479]步骤7：将K2CO3水溶液(2.81g，在17mL水中，20.3mmol)添加到中间体15e(6.79g，10.2mmol)的MeOH(34mL)溶液中，将反应混合物在室温下搅拌过夜。然后部分地减压浓缩溶剂(直至剩余1/3体积)，之后通过加入饱和NaHCO3水溶液(200mL)来沉淀中间体15f。过滤固体，用水洗涤，并在高真空下干燥过夜(5.02g，86％收率)。ESI-MS：m/z 572.8[M+H]+。[0480]步骤8：将中间体15f(5.02g，8.78mmol)、4-硝基苯酚(12.2g，87.8mmol)和Et3N(14.7mL，105mmol)溶于DCM(40mL)中。将反应混合物冷却至–78℃，之后滴加4-硝基苯基氯硫酸盐(4.59g，19.3mmol)的DCM(4.0mL)溶液。使反应溶液温热至室温过夜，之后用DCM稀释并用1.0M NaH2PO4水溶液洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。粗制物质通过硅

1

胶柱色谱法纯化，得到纯的中间体S3(2.44g，收率：36％)。H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 12.45(br d,J＝3.5Hz,1H),8.88(br t,J＝5.6Hz,1H),8.27(d,J＝9.4Hz,2H),8.17(s,1H),7.94(d,J＝4.1Hz,1H),7.17-7.57(m,11H),6.90(dd,J＝9.1,2.6Hz,4H),6.29(dd,J＝18.2,2.3Hz,1H),4.52-4.87(m,2H),3.93(br t,J＝6.4Hz,1H),3.71(s,6H),2.93-3.05(m,1H),2.78-2.92(m,1H)；ESI-MS：m/z 773.9[M+H]+。[0481]实施例16：中间体S4的合成

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[0482]

步骤1：在0℃下，将碘(11.43g，45.03mmol)的THF(50mL)溶液滴加到中间体16a

(8.0g，22.51mmol)、三苯基膦(11.81g，45.03mmol)和咪唑(4.6g，67.54mmol)在无水THF(100mL)中的混合物中。将反应混合物温热至室温并搅拌过夜。通过过滤除去沉淀物并减压浓缩滤液。将所得残余物重新溶于DCM(300mL)中，并用饱和Na2S2O3水溶液洗涤。静置10分钟后，白色固体从有机层中沉淀出来并通过过滤移除。将水层用DCM萃取。将合并的有机层减压浓缩，将所得残余物在最小量的DCM中研磨20分钟。通过过滤分离所得沉淀物。重复该过程(滤液浓缩、用DCM研磨以及过滤)两次。将收集的产物在高真空下干燥，得到中间体16b(7.5g，收率：68％)。ESI-MS：m/z 466.0[M+H]+。[0484]步骤2：将中间体16b(7.5g，15.26mmol)和NaN3(4.96g，76.31mmol)的DMF(160mL)溶液在35℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，用饱和Na2CO3水溶液(100mL)稀释，并用EtOAc和DCM萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥并减压蒸发。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至100％EtOAc的石油醚溶液，然后用0％至10％MeOH的EtOAc溶液)纯化，得到为白色固体的中间体16c(5.4g，收率：91％)。ESI-MS：m/z 380.9[M+H]+。[0485]步骤3：在0℃下，将DMTrCl(7.18g，21.2mmol)和DMAP(647mg，5.3mmol)添加到中间体16c(4.1g，10.6mmol)的吡啶(80mL)溶液中。将反应混合物在55℃下搅拌过夜，然后将其冷却至室温并用甲醇(40mL)淬灭。接下来，加入水并用EtOAc实施萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至60％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到中间体16d(6.8g，收率：92％)。ESI-MS：m/z 683.2[M+H]+。[0486]步骤4：将三苯基膦(3.43g，13.06mmol)添加到中间体16d(6.5g，9.33mmol)的THF(70mL)溶液中。在N2下，将反应混合物在40℃下搅拌2小时。接下来，加入水(35mL)并在40℃下继续搅拌过夜。将反应溶液部分地压力浓缩，之后加入DCM和水。分离水层并用DCM萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法(首先通过用

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EtOAc等度洗脱来洗脱三苯基膦氧化物，之后施加0％至10％MeOH的DCM溶液梯度)纯化，得到中间体16e(5.0g，收率：78％)。ESI-MS：m/z 657.1[M+H]+。[0487]步骤5：将向其中加入4-硝基苯酚(9.10g，65.43mmol)、Et3N(3.97g，39.26mmol)和活化的分子筛的中间体16e(4.5g，6.54mmol)的DCM(110ml)溶液30分钟在室温下搅拌。将反应混合物冷却至–78℃，之后加入4-硝基苯基氯硫酸盐(7.77g，32.71mmol)的无水DCM(40mL)溶液。在–78℃下继续搅拌2.5小时，之后将反应混合物温热至室温过夜。通过过滤除去分子筛。将滤液用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用Na2SO4干燥，并减压浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至65％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到中间体S4(4.95g，收率：

1

88％)。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.16(1H,s),8.88-8.98(1H,m),8.57(2H,s),8.21(2H,br d,J＝8.07Hz),7.99(2H,br d,J＝7.58Hz),7.58-7.65(1H,m),7.48-7.55(2H,m),7.41(5H,M),7.30(5H,m),7.18-7.25(1H,m),6.88(4H,br d,J＝8.07Hz),6.49(1H,br t,J＝7.09Hz),4.37(1H,br s),3.9’(1H,br s),3.67(6H,s),2.94-3.15(2H,m),2.57-2.68(1H,m),1.92-2.00(2H,m)；ESI-MS：m/z 858.6[M+H]+。[0488]实施例17：中间体S5的合成

[0489]

[0490]

步骤1：在-5℃下，将NaH(60％矿物油溶液，4.86g，121.6mmol)添加到腺苷(17a，25g，93.55mmol)的DMF(900mL)液中。将反应混合物搅拌1小时，之后滴加(1小时)4-甲氧基苄基氯(15.2mL，112.26mmol)的DMF(100mL)溶液。将所得反应溶液在室温下搅拌12小时。加入水(30mL)并继续搅拌10分钟。减压浓缩，之后通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到纯的中间体17b级分(10g，收率：28％)和含有中间体17b及其3'-112

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PMB保护的区域异构体的级分，后者可通过制备型反相HPLC(固定相：Phenomenex Synergi Max-RP，10μm，250mm×35mm；流动相：水(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)进一步分离，以提供额外量的纯的中间体17b(5g，收率：14％)。ESI-MS：m/z 387.9[M+H]+。[0491]步骤2：在0℃下，将TMSCl(23.73mL，187.15mmol)添加到中间体17b(14.5g，37.43mmol，通过与无水吡啶共蒸发干燥)的无水吡啶(200mL)溶液中。将溶液在室温下搅拌2小时，之后在冰浴中再次冷却，然后加入苯甲酰氯(8.62mL，74.8mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌12小时。接下来，在0℃下小心地加入水(50mL)和氨水(100mL)。将所得溶液在室温下搅拌30分钟，之后用盐水稀释并用DCM萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在EtOAc(150mL)和MeOH(4mL)的混合物中研磨，得到为白色固体的中间体17c(17g，收率：92％)。ESI-MS：m/z 491.9[M+H]+。[0492]步骤3：在0℃下，将CBr4(8.6g，25.94mmol)分批加入中间体17c(8.5g，17.29mmol)、三苯基膦(6.80g，25.94mmol)、TBAI(1.28g，3.46mmol)和NaN3(6.42g，98.75mmol)在DMF(150mL)中的搅拌悬浮液中。将反应混合物在室温下搅拌2小时，之后在35℃下搅拌36小时。接下来，加入饱和NaHCO3水溶液和盐水(室温)，用EtOAc萃取所得混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并压力浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至100％EtOAc/DCM(1/1)的石油醚溶液)纯化，得到为白色泡沫的中间体17d(15g，收率：83％)。ESI-MS：m/z 516.8[M+H]+。[0493]步骤4：将DMAP(1.8g，30.1mmol)和DMTrCl(9.8g，29.0mmol)添加到中间体17d(7.5g，14.5mmol)的吡啶(100mL)溶液中。将反应混合物在80℃下搅拌24小时，之后冷却至室温并用甲醇(5mL)淬灭。继续搅拌10分钟，之后减压除去溶剂。将所得残余物重新溶于DCM中。将有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法(0％至67％EtOAc/DCM(1/1)的石油醚溶液)纯化，得到为黄色固体的中间体17e(10g，收率：84％)。ESI-MS：m/z 819.2[M+H]+。[0494]步骤5：将三苯基膦(2.24g，8.55mmol)添加到中间体17e(5.0g，6.1mmol)的THF(50mL)溶液中。在N2下，将反应混合物在40℃下搅拌2小时，加入水(25mL)，并在40℃下继续搅拌12小时。接下来，将反应溶液冷却至室温，用盐水稀释并用DCM萃取。将有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并减压浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至9％MeOH的DCM溶液)纯化，得到中间体17f(4g，收率：82％)。ESI-MS：m/z 794.3[M+H]+。[0495]步骤6：在N2下，将向其中加入4-硝基苯酚(2.1g，15mmol)、Et3N(3.1g，30mmol)和活化的分子筛的中间体17f(4.0g，5.0mmol)的DCM(100ml)溶液在室温下搅拌30分钟。接下来，将反应混合物冷却至–78℃，并加入4-硝基苯基氯硫酸盐(3.6g，15mmol)的无水DCM(30mL)溶液。在–78℃下继续搅拌2小时，之后将反应混合物温热至室温，并再搅拌1小时。通过过滤除去分子筛，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤滤液。将水层用DCM萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥并减压浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至65％EtOAc的石油醚

1

溶液)纯化，得到中间体S5(4.4g，收率：88％)。H NMR(400MHz,CD3CN)δppm 9.32(br s,1H),9.30(br s,1H),8.12(s,1H),8.08(d,J＝9.0Hz,2H),7.98-8.03(m,3H),7.61-7.68(m,3H),7.50-7.60(m,4H),7.46(d,J＝8.8Hz,2H),7.32-7.39(m,2H),7.24-7.32(m,3H),6.91(br d,J＝7.8Hz,4H),6.80(d,J＝8.3Hz,2H),6.40(d,J＝8.3Hz,2H),6.12(d,J＝7.8Hz,1H),4.62(d,J＝12.0Hz,1H),4.58(dd,J＝7.7,5.4Hz,1H),4.48(d,J＝5.3Hz,1H),4.10(d,J＝

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12.3Hz,1H),3.78(s,3H),3.77(s,3H),3.57(s,3H),3.43(br s,1H),2.98(br d,J＝14.1Hz,1H),2.68-2.80(m,1H)；ESI-MS：m/z 994.3[M+H]+。[0496]实施例18：中间体S6的合成

[0497]

步骤1：将向其中加入咪唑(1.02g，15.06mmol)和TBSCl(1.51g，10.04mmol)的叠氮化物18a(2g，5.02mmol，CAS：2241580-02-7)的DMF(10mL)溶液在室温下搅拌2小时。将反应混合物用EtOAc稀释并用水洗涤。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至15％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为黄色固体的中间体18b(2.57g，收率：100％)。ESI-MS：m/z 513.2[M+H]+。[0499]步骤2：将中间体18b(1.29g，2.51mmol)的EtOAc(150mL)溶液在Pd/C(10％，2.95g)上于大气压下氢化2小时。接下来，将反应混合物过滤并将滤液减压浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体中间体18c(收率：

1

69％)。H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 9.12(br s,1H),8.78(s,1H),8.40(s,1H),8.23(d,J＝9.0Hz,2H),8.02(d,J＝7.9Hz,2H),7.60-7.67(m,1H),7.50-7.58(m,2H),7.45(d,J＝9.0Hz,2H),6.47(br s,1H),6.37(d,J＝18.5Hz,1H),5.66(dd,J＝52.3,4.2Hz,1H),4.98(br d,J＝26.2Hz,1H),4.29(br d,J＝9.5Hz,1H),4.15(br d,J＝12.1Hz,1H),3.94(dd,J＝12.0,2.1Hz,1H),0.86(s,9H),0.07(s,3H),0.04(s,3H)；ESI-MS：m/z 487.1[M+H]+。[0500]步骤3：将向其中加入4-硝基苯酚(900mg，6.47mmol)、Et3N(1.79mL，12.95mmol)和活化的分子筛的中间体18c(1.05g，2.16mmol)的DCM(40ml)溶液在室温下搅拌30分钟。将混合物冷却至–78℃，之后加入4-硝基苯基氯硫酸盐(1.54g，6.47mmol)的DCM(10mL)溶液，在–78℃下继续搅拌2.5小时。将反应混合物过滤并用NaHCO3水溶液洗涤，用DCM萃取含水洗涤层。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至100％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为白色固体的中间体S6(1.24g，收率：83.5％)。ESI-MS：m/z 688.2[M+H]+。[0501]实施例19：中间体S7的合成

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[0502]

将胺19a(3.0g，6.40mmol，CAS：195375-61-2)、4-硝基苯酚(8.90g，64mmol)和Et3N

(10.7mL，76.8mmol)在DCM(22ml)中的混合物冷却至–78℃，之后滴加4-硝基苯基氯硫酸盐(3.04g，12.8mmol)的DCM(45mL)溶液。将所得混合物在室温下搅拌过夜，之后用DCM(50mL)稀释并用1.0M NaH2PO4水溶液洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。粗制物质通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：20％至80％EtOAc的DCM溶液)纯化，得到纯的中间体S7(2.68g，

1

收率：62.5％)。H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 11.20(br s,1H),9.45(d,J＝7.6Hz,1H),8.75(s,1H),8.60(s,1H),8.34-8.39(m,2H),8.02-8.07(m,2H),7.53-7.68(m,6H),6.49(dd,J＝6.7,5.0Hz,1H),4.50(quin,J＝6.9Hz,1H),3.99-4.07(m,1H),3.87(dd,J＝11.7,4.1Hz,1H),3.75(dd,J＝11.1,4.7Hz,1H),3.02-3.12(m,1H),2.59(dt,J＝13.6,7.0Hz,1H),0.80(s,9H),-0.03(s,3H),-0.05(s,3H)；ESI-MS：m/z 670.8[M+H]+。[0504]下文提到的羟基核苷用作代表如上文所定义的式VII、XVII、XXV和XXXIII的示例的中间体。那些没有商业来源也没有文献程序的方法是通过实施例20至35中所述的方法制备的。

[0503]

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[0505]

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[0506]

[0507]

实施例20：中间体A3a的合成

[0508]

在0℃下，将DMTrCl(3.10g，9.15mmol)分批加入中间体17c(3.0g，6.1mmol)在无水

吡啶(50mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温下搅拌直至完全转化(约2小时)，之后用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。将有机相用MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至100％EtOAc的石油醚溶液)进行纯化，得到为白色固体的中间

1

体A3a(4.77g，收率：96％)。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.07(s,1H),11.56(s,1H),8.02(s,1H),7.28-7.33(m,2H),7.20-7.28(m,2H),7.13-7.20(m,7H),6.71-6.88(m,6H),5.95(d,J＝5.4Hz,1H),5.29(d,J＝5.9Hz,1H),4.63(d,J＝11.7Hz,1H),4.39-4.52(m,2H),4.29-4.39(m,1H),4.04-4.08(m,1H),3.71(s,6H),3.66-3.69(m,3H),3.25(br dd,J＝10.4,5.7Hz,1H),3.15(br dd,J＝10.5,2.9Hz,1H),2.74(spt,J＝6.8Hz,1H),1.10(d,J＝6.8Hz,6H)；ESI-MS：m/z＝794.3[M+H]+。[0510]实施例21：中间体A5的合成

[0509]

[0511]

[0512]

步骤1：在0℃下，将NaH(60％矿物油溶液，1.41g，35.4mmol)添加到N-异丁酰鸟苷

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(21a，5.0g，14mmol，CAS：64350-24-9)的DMF(120mL)悬浮液中。将反应混合物搅拌90分钟，之后滴加4-甲氧基苄基氯(2.87mL，21.2mmol)的DMF(10mL)溶液(1小时)，在室温下继续搅拌过夜。接下来，将反应溶液用1N HCl水溶液中和并减压蒸发。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到中间体21b及其3’-PMB保护的区域异构体(结构未示出)的混合物。通过制备型反相HPLC(固定相：Phenomenex Synergi Max-RP，10μm，250mm×35mm；流动相：水(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)进一步纯化，得到作为第一洗脱异构体的纯的中间体21b(1.5g，收率：22％)。ESI-MS：m/z 574.3[M+H]+。[0513]步骤2：将中间体21b(1.5g，3.2mmol)和DMTrCl(1.72g，5.07mmol)的吡啶(15mL)溶液在室温下搅拌直至完全转化。将反应混合物用过量的DCM稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％

1

至100％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为白色固体的中间体A5(1.7g，收率：69％)。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.07(s,1H),11.56(s,1H),8.02(s,1H),7.28-7.33(m,2H),7.20-7.28(m,2H),7.13-7.20(m,7H),6.71-6.88(m,6H),5.95(d,J＝5.4Hz,1H),5.29(d,J＝5.9Hz,1H),4.63(d,J＝11.7Hz,1H),4.39-4.52(m,2H),4.29-4.39(m,1H),4.04-4.08(m,1H),3.71(s,6H),3.66-3.69(m,3H),3.25(br dd,J＝10.4,5.7Hz,1H),3.15(br dd,J＝10.5,2.9Hz,1H),2.74(spt,J＝6.8Hz,1H),1.10(d,J＝6.8Hz,6H)；ESI-MS：m/z 776.5[M+H]+。

[0514]实施例22：中间体A9的合成

[0515]

步骤1：向4-C-[(苯基甲氧基)甲基]-3-O-(苯基甲基)-,1,2-二乙酸酯5-(4-甲基苯磺酸酯)-L-呋喃木糖(22a，10.21g，19.55mmol，CAS：209968-86-5)和6-N-苯甲酰基腺嘌呤(5.61g，23.45mmol，CAS：4005-49-6)的无水1,2-二氯乙烷(255mL)悬浮液中添加双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(BSA，10.34g，50.82mmol)，将混合物回流1小时。将反应混合物冷却至室温，加入TMSOTf(8.69g，39.09mmol)，并且在回流温度下再次搅拌16小时。接下来，将所得反应溶液冷却至室温，倒入到冰冷的饱和NaHCO3水溶液中，搅拌30分钟并过滤。分离有机层并用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：1％至1.5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为浅黄色固体的中间体22b(12.4g，收率：74％)。ESI-MS：m/z 702.1[M+H]+。

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[0516]

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步骤2：在0℃下，将LiOH.H2O(0.86g，20.49mmol)添加到中间体22b(2.88g，

4.10mmol)的THF/水溶剂混合物(6/4，45mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌5小时，之后用EtOAc将其稀释。分离有机相并用盐水洗涤，用DCM萃取水层。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至100％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为淡黄色固体的中间体22c(收率：77％)。ESI-MS：m/z 564.1[M+H]+。[0518]步骤3：在0℃下，将甲磺酸(MSA，46mL g，1.42mol)添加到中间体22c(10.0g，17.74mmol)的DCM(150mL)搅拌溶液中。将反应混合物在室温下搅拌2.5小时，之后缓慢添加到固体NaHCO3(100g)的DCM(180mL)悬浮液中。搅拌1.5小时后，加入MeOH(10mL)，并再继续搅拌30分钟。过滤反应混合物并将滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为灰白色固体的中间体22d(收率：77％)(5.6g，收率：82％)。ESI-MS：m/z 383.9[M+H]+。[0519]步骤4：将DMTrCl(530mg，1.57mmol)添加到中间体22d(500mg，1.30mmol)的吡啶(5mL)溶液中，并在室温下搅拌1小时。接下来，将反应混合物用DCM稀释，并用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。将水层用DCM萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的中

1

间体A9(421mg：收率：46％)。H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 8.74(s,1H),8.51(s,1H),8.09(d,J＝7.3Hz,2H),7.62-7.69(m,1H),7.55-7.61(m,2H),7.46-7.51(m,2H),7.34-7.39(m,4H),7.26-7.33(m,2H),7.19-7.26(m,1H),6.85-6.90(m,4H),6.18(s,1H),4.66(s,1H),4.51(s,1H),3.98-4.06(m,2H),3.78(s,6H),3.62(d,J＝10.8Hz,1H),3.51(d,J＝11.0Hz,1H)；ESI-MS：m/z 686.3[M+H]+。[0520]实施例23：中间体A10的合成

[0521]

步骤1：在–5℃和N2下，将TMSCl(3.81g，35.06mmol)滴加到9-(2'-脱氧-2'-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)鸟嘌呤(23a，2.0g，7.01mmol，CAS：103884-98-6)的无水吡啶溶液中。将反应混合物在室温下搅拌2小时。将所得反应溶液再次冷却至–5℃，滴加异丁酸酐(1.33g，8.41mmol)，在0℃下继续搅拌20小时。接下来，加入5％NaHCO3水溶液(30mL)，将所得混合物在室温下搅拌1小时，然后用6M HCl水溶液(6.5mL)中和(pH 7)。真空浓缩混合物，得到粗制制中间体23b，其将原样用于下一步。ESI-MS：m/z 355.9[M+H]+。[0523]步骤2：在–5℃和N2下，将DMTrCl(3.00g，8.44mmol)添加到上述中间体23b(在使用前与无水吡啶共同蒸发)的吡啶溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌15小时。接下来，用固体NaHCO3(1.3g，2.2当量)和50ml水将混合物的pH调节至7。然后将混合物真空浓缩以除去吡啶。将残余物溶于DCM中并用水洗涤。将有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：50％至100％EtOAc的庚烷溶液)纯化，得到为浅黄色泡沫

1

的中间体A10(4.0g，收率：87％，经两个步骤)。H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 12.11(s,1H),11.68(s,1H),7.91(d,J＝2.2Hz,1H),7.39(d,J＝7.6Hz,2H),7.21-7.30(m,7H),6.86(d,J

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[0522]

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＝9.0Hz,2H),6.85(d,J＝9.0Hz,2H),6.29(dd,J＝15.1,4.5Hz,1H),6.00(d,J＝4.9Hz,1H),5.20(dt,J＝52.2,4.0Hz,1H),4.39-4.51(m,1H),4.03-4.07(m,1H),3.73(s,6H),3.38(dd,J＝10.2,7.2Hz,1H),3.23(dd,J＝10.4,3.3Hz,1H),2.76(spt,J＝6.8Hz,1H),1.12(d,J＝6.8Hz,3H),1.12(d,J＝6.5Hz,3H)；ESI-MS：m/z 658.1[M+H]+[0524]实施例24：中间体A11的合成

[0525]

在0℃下，将DMTrCl(4.42g，11.40mmol)的无水吡啶(10mL)溶液添加到24a(2.75g，10.86mmol，CAS：56220-50-9)的无水吡啶(20.0mL)溶液中。将反应混合物在5℃下搅拌20小时，然后用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：20％至80％EtOAc的庚烷溶液)纯化，得到

1

为白色固体的中间体A11(4.3g，收率：71％)。H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 12.81(br s,1H),8.24-8.32(m,1H),7.22-7.28(m,2H),7.14-7.20(m,3H),7.12(d,J＝8.7Hz,4H),6.77(d,J＝9.0Hz,2H),6.73(d,J＝9.0Hz,2H),6.62(dd,J＝7.1,3.5Hz,1H),5.45(br d,J＝3.0Hz,1H),4.56-4.64(m,1H),4.02(td,J＝5.8,3.4Hz,1H),3.71(s,3H),3.70(s,3H),3.09(dd,J＝10.4,3.3Hz,1H),2.95-3.04(m,2H),2.45-2.53(m,1H)；ESI-MS：(m/z)554.1[M-H]-。

[0527]实施例25：中间体A12的合成

[0526]

[0528]

步骤1：在0℃下，将NaH(在矿物油中的60％分散液，0.51g，12.8mmol)分批加入4-氯-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2.0g，11.6mmol，CAS：582313-57-3)的无水MeCN(30mL)溶液中。将反应混合物温热至室温。搅拌1小时后，加入1-氯-3,5-二-(4-氯苯甲酰基)-2-脱氧-D-核糖(25a，6.02g，14.0mmol，CAS：21740-23-8)并继续搅拌2小时。随后，将反应溶液用冰冷的水淬灭并再搅拌20分钟。接下来，滗出溶剂，并将所得残余物溶于乙醚，搅拌20分钟并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至10％EtOAc的庚烷溶液)进行纯化，得到为

[0529]

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灰白色泡沫的中间体25b(3.6g，收率：54％)。ESI-MS：m/z 564.0[M+H]+。[0530]步骤2：在110℃下，将中间体25b(3.6g，6.3mmol)在密封管中的饱和甲醇氨溶液(72mL)中搅拌直至完全转化(约2天)。减压浓缩反应混合物。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至10％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为灰白色粉末的中间体25c(1.6g，收率：73％)。ESI-MS：m/z 269.0[M+H]+。[0531]步骤3：在0℃下，将TMSCl(3.78mL，29.8mmol)滴加到中间体25c(1.6g，5.94mmol)的无水吡啶(22.4mL)溶液中。将反应溶液在室温下搅拌1小时，之后再次冷却至0℃。接下来，在15分钟的时间段内滴加苯甲酰氯(3.46mL，29.8mmol)，并在室温下继续搅拌直至完全转化。接下来，将反应混合物冷却至0℃，添加水，之后在15分钟后添加氨水(25％，12.1mL)，继续搅拌30分钟。将反应溶液用乙酸中和并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至4％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为白色固体的中间体25d(1.97g，收率：88％)。ESI-MS：m/z 373.0[M+H]+。[0532]步骤4：将向其中(分批)加入DMAP(0.6g，4.9mmol)和DMTrCl(5.36g，15.8mmol)的中间体25d(3.7g，9.9mmol)的无水吡啶(55.5mL)溶液在室温下搅拌，直至完全转化(约2小时)。用甲醇(30mL)猝灭反应混合物，并减压浓缩。将获得的残余物溶于EtOAc中并用水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至

1

0.5％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为灰白色泡沫的中间体A12(6.0g，收率：89％)。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.29(br s,1H),8.66(s,1H),7.99-8.08(m,2H),7.61-7.69(m,1H),7.52-7.59(m,3H),7.34-7.39(m,2H),7.16-7.31(m,7H),6.82-6.87(m,4H),6.73(t,J＝6.2Hz,1H),5.38(d,J＝4.8Hz,1H),4.33-4.42(m,1H),3.93-4.00(m,1H),3.72(s,3H),3.72(s,3H),3.20(dd,J＝10.3,6.2Hz,1H),3.13(dd,J＝10.3,3.4Hz,1H),2.59(dt,J＝13.3,6.8Hz,1H),2.31(ddd,J＝13.8,6.2,4.1Hz,1H)；ESI-MS：m/z 675.4[M+H]+。[0533]中间体A28可使用用于制备中间体A12的该途径制备，但使用(2R,3S,5R)-5-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-(2-羟乙基)四氢呋喃-3-醇来代替化合物33a。[0534]实施例26：中间体A14的合成

[0535]

步骤1：在0℃下，将NaH(1.36g，31.1mmol)分批加入5,6-二氯-1H-苯并咪唑(5.3g，28.34mmol，CAS：6478-73-5)的无水MeCN(185mL)溶液中。在室温下搅拌1小时后，将反应混合物再次冷却至0℃，并且分批添入1-氯-3,5-二-(4-氯苯甲酰基)-2-脱氧-D-核糖(26a，11g，28.34mmol)。在室温下持续搅拌直至完全转化(约2小时)。接下来，将反应混合物用EtOAc稀释并用水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法

[0536]

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(梯度洗脱：0％至40％EtOAc的庚烷溶液)进行纯化，得到为灰白色泡沫的中间体26b(14g，收率：92％)。ESI-MS：m/z 539[M+H]+。[0537]步骤2：在室温下，将中间体26b(14g，25.9mmol)的饱和氨的甲醇溶液(280mL)溶液在密封管中搅拌，直至完全转化(约16小时)。接下来，将反应溶液减压浓缩，并且将粗制残余物用DCM洗涤，以获得为白色固体的中间体26c(7g，收率：89％)。ESI-MS：m/z 302[M+H]+。[0538]步骤3：将向其中(分批)加入DMAP(1.41g，11.5mmol)和DMTrCl(11.7g，34.7mmol)的中间体26c(7g，23.17mmol)的无水吡啶(105mL)溶液在室温下搅拌，直至完全转化(约6小时)。用甲醇(10mL)猝灭反应混合物，并减压浓缩。将获得的残余物溶于DCM中并用水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至0.5％

1

MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为灰白色泡沫的中间体A14(8g，收率：57％)。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.53(s,1H),8.03(s,1H),7.98(s,1H),7.23-7.28(m,2H),7.17-7.22(m,3H),7.11-7.16(m,4H),6.75(m,J＝8.6,8.6Hz,4H),6.41(t,J＝5.9Hz,1H),5.40(d,J＝4.8Hz,1H),4.42(quin,J＝5.2Hz,1H),3.94-4.03(m,1H),3.71(s,6H),3.13(dd,J＝10.3,2.8Hz,1H),3.06(dd,J＝10.3,6.2Hz,1H),2.78(dt,J＝12.9,6.3Hz,1H),2.41(dt,J＝12.9,6.3Hz,1H)。ESI-MS：m/z 605[M+H]+。[0539]实施例27：中间体A15的合成

[0540]

中间体A15使用如针对从26b制备中间体A14所举例说明的程序，由2'-脱氧水粉蕈

1

素(27a，CAS：4546-68-3)制得。H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:9.18(s,1H),8.87(s,1H),8.72(s,1H),7.30(d,J＝6.9Hz,2H),7.18(m,7H),6.79(d,J＝9.0Hz,2H),6.74(d,J＝9.0Hz,2H),6.51(t,J＝6.2Hz,1H),5.41(d,J＝4.1Hz,1H),4.53(m,1H),4.03(q,J＝4.6Hz,1H),3.72(s,3H),3.71(s,3H),3.18(m,2H),2.96(m,1H),2.40(m,1H)。ESI-MS：m/z 539[M+H]+。

[0542]实施例28：中间体A16的合成

[0541]

[0543]

步骤1：在–5℃和N2下，将TMSCl(6.46g，59.47mmol)滴加到8-氮杂-2'-脱氧腺苷(28a，3.0g，11.9mmol，CAS：34536-05-5)的无水吡啶溶液中。将反应溶液在室温下搅拌2小时，之后再次冷却至-5℃。加入苯甲酸酐(4.04g，17.84mmol)并在0℃下继续搅拌20小时。加入5％NaHCO3水溶液(35mL)，将所得混合物在室温下搅拌1小时。接下来，加入氨(直至pH 8)并在室温下继续搅拌1小时。用6M HCl中和(pH 7)所得反应溶液并真空浓缩，获得粗制制中间体28b，其将原样用于下一步。ESI-MS：m/z 357.8[M+H]+。

[0544]

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步骤2：在0℃下，将DMTrCl(4.84g，14.28mmol)的无水吡啶(10.0mL)溶液添加到上

述中间体28b的无水吡啶(50.0mL)溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌12小时，之后添加EtOAc。将所得溶液用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：20％至50％EtOAc的庚烷溶液)纯化，得到为白色固体的

1

中间体A16(6.0g，收率：77％，经两个步骤)。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.91(br s,1H),8.93(br s,1H),8.09(br d,J＝7.3Hz,2H),7.69(t,J＝7.3Hz,1H),7.59(t,J＝7.8Hz,2H),7.20-7.26(m,2H),7.09-7.20(m,7H),6.83(br s,1H),6.76(d,J＝8.7Hz,2H),6.70(d,J＝8.7Hz,2H),5.49(d,J＝5.0Hz,1H),4.67(quin,J＝5.7Hz,1H),4.05-4.09(m,1H),3.69(s,3H),3.68(s,3H),3.12(br dd,J＝10.1,3.2Hz,2H),3.05(dd,J＝10.1,6.9Hz,1H),2.52-2.59(m,1H)；ESI-MS：m/z 659.4[M+H]+。[0546]实施例29：中间体A17的合成

[0547]

步骤1：将咪唑(440mg，6.46mmol)和TBSCl(617mg，4.09mmol)添加到29a(0.8g，2.15mmol，CAS：2241578-27-6)的DMF(6mL)溶液中，并在室温下搅拌1.5小时。接下来，将反应混合物用EtOAc稀释，并用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至70％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为白色固体的中间体29b(5.5g)。ESI-MS：m/z 486.2[M+H]+。[0549]步骤2：将DMTrCl(41.78g，5.25mmol)添加到中间体29b(1.7g，0.88mmol，使用前与吡啶共蒸发)的无水吡啶(15mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌2小时，将其与另一批料合并以进行检查。加入EtOAc，将有机层用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(用0％至70％EtOAc的石油醚溶液洗脱)纯化，得到中间体29c及其2’-羟基保护的区域异构体(方案中未示出结构)的混合物(3.9g)。ESI-MS：m/z 788.4[M+H]+。[0550]步骤3：在0℃下，将NaH(60％矿物油溶液，482mg，12.05mmol)添加到中间体29c及

[0548]

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其2'-羟基保护的区域异构体(2.5g，3.17mmol)的DMF(25mL)溶液中。在0℃下搅拌1小时后，滴加(约10分钟)4-甲氧基苄基氯(745mg，4.76mmol)的DMF(5mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌2小时，之后通过滴加水(5mL)将其淬灭。接下来，加入EtOAc，将所得溶液相继地用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至40％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到中间体29d及其区域异构体的混合物(1.9g)。ESI-MS：m/z 908.4[M+H]+。[0551]步骤4：用DCA(690μL，8.37mmol)和水(380μL，20.92mmol)处理上述异构体混合物(1.9g，2.09mmol)的DCM(30mL)溶液。将所得黄色溶液在室温下搅拌2小时，之后通过加入MeOH(150μL)和吡啶(662mg)将其淬灭。再搅拌15分钟后，将反应混合物减压浓缩，并通过硅胶柱色谱纯化，得到中间体29e和其2'3'-保护的区域异构体的混合物(1.05g，收率：60％)。ESI-MS：m/z 606.1[M+H]+。[0552]步骤5：用TBAF(1M的THF溶液，3.0mL，3.0mmol)处理上述异构体混合物(中间体29e+2'3'-保护的区域异构体，1.2g，1.98mmol)的THF(12mL)溶液，并在室温下搅拌3小时。将所得反应溶液用EtOAc稀释，随后用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发。通过硅胶柱色谱法(等度洗脱：5％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到中间体29f及其3’-PMB保护的区域异构体的混合物。将该化合物混合物与MeOH一起研磨，导致沉淀出纯的3’-PMB保护的异构体(主要异构体)，将其过滤分离并用少量冷MeOH洗涤。浓缩滤液，并

1

通过反相制备型HPLC纯化，得到为次要异构体的所需中间体29f。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.61(br s,1H),8.03(br d,J＝8.0Hz,2H),7.92(br s,1H),7.69-7.65(m,1H),7.58-7.54(m,2H),7.33(d,J＝8.0Hz,2H),6.92(d,J＝8.0Hz,2H),5.33(d,J＝8.0Hz,1H),5.21(br d,J＝8.0Hz,1H),4.87(t,J＝8.0Hz,1H),4.66(d,J＝8.0Hz,1H),4.57-4.49(m,2H),4.01(q,J＝4.0Hz,1H),3.95(t,J＝4.0Hz,1H),3.75(s,3H),3.60-3.55(m,1H),3.50-3.45(m,1H)；ESI-MS：m/z 492.3[M+H]+。

1[0553]3’-PMB区域异构体：H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51(s,1H),8.03(br d,J＝8.0Hz,

2H),7.81(s,1H),7.67-7.63(m,1H),7.57-7.53(m,2H),7.17(d,J＝8.0Hz,2H),6.80(d,J＝8.0Hz,2H),5.28(d,J＝8.0Hz,1H),5.09(br d,J＝4.0Hz,1H),4.83(br t,J＝4.0Hz,1H),4.64(d,J＝12Hz,1H),4.47(d,J＝12Hz,1H),4.28(t,J＝4.0Hz,1H),4.20(q,J＝4.0Hz,1H),3.91(q,J＝4.0Hz,1H),3.70(s,3H),3.61-3.58(m,1H),3.51-3.47(m,1H)；ESI-MS：m/z 492.2[M+H]+。[0554]步骤6：将DMTrCl(99mg，0.29mmol)添加到中间体29f(110mg，0.22mmol)的吡啶(5mL)溶液中，并在室温下搅拌过夜。浓缩所得反应溶液。将残余物溶于DCM中，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法纯化，得到中间体A17(收率：约47％)。ESI-MS：m/z 794.4[M+H]+。[0555]实施例30：中间体A20的合成

[0556]

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CN 112424212 A[0557]

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在10℃和氩气下，将DMTrCl(4.85g，14.3mmol)添加到N-苯甲酰基-2-(苯甲酰基氨

基)-2'-脱氧-2'-氟腺苷(30a，7.02g，14.3mmol，CAS：1786418-21-0)的吡啶/DMF溶剂混合物(2/1，81mL)溶液中。使反应混合物温热至室温过夜，之后用DCM稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。用DCM反萃取水相。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗制产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：1％至2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到中间体A20(7.48g，收率：

1

66％)。H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 11.20(s,1H),10.90(s,1H),8.51(s,1H),8.02-8.09(m,2H),7.81-7.88(m,2H),7.46-7.68(m,6H),7.22-7.31(m,2H),7.06-7.15(m,7H),6.68(d,J＝9.4Hz,2H),6.62(d,J＝8.8Hz,2H),6.39(d,J＝20.5Hz,1H),5.54(d,J＝7.0Hz,1H),5.54(dd,J＝52.7,4.7Hz,1H),4.85-5.06(m,1H),4.02-4.18(m,1H),3.66(s,3H),3.64(s,3H),3.51(dd,J＝11.1,7.0Hz,1H),3.12(br d,J＝10.4Hz,1H)；ESI-MS：m/z 795.3[M+H]+。[0558]实施例31：中间体A21的合成

[0559]

步骤1：在0℃下，将NaH(约55％矿物油分散液，1.15g，48.1mmol)分批添入5-(二乙氧基甲基)-1H-咪唑-4-甲酸甲酯(10g，43.7mmol，CAS：85109-99-5)的无水MeCN(500mL)溶液中，然后在室温下搅拌1小时。将反应混合物再次冷却至0℃，之后分批加入1-氯-3,5-二-(4-氯苯甲酰基)-2-脱氧-D-核糖(25a，18.7g，43.7mmol，CAS：582313-57-3)。在室温下持续搅拌直至完全转化(约2小时)。接下来，将反应混合物用EtOAc稀释并用水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法进行纯化(梯度洗脱：0至40％EtOAc的己烷溶液)，得到中间体31a，为灰白色泡沫(10g，收率：37％)。ESI-MS：m/z621.0[M+H]+。[0561]步骤2：将中间体31a(10g，16.1mmol)的80％乙酸水溶液(100mL)溶液在室温下搅拌14小时。通过过滤分离所得固体，用水洗涤并在真空下干燥，得到为白色固体的中间体31b(4.5g，收率：51％)。ESI-MS：m/z 569.0[M+Na]+。[0562]步骤3：将1M肼的THF溶液(164mL，164mmol)添加到中间体31b(4.5g，8.2mmol)的无水EtOH(50mL)溶液中。将反应溶液在回流温度下搅拌直至完全转化(约72小时)，使THF完全蒸发(注意：在THF存在下，反应非常缓慢)。过滤所得固体，用乙醇洗涤，并在高真空下干燥，得到为灰白色固体的中间体31c(1.4g，收率：67％)。[0563]步骤4：将DMTrCl(3.0g，8.8mmol)分批加入中间体31c(1.4g，5.5mmol，通过与无水甲苯和无水吡啶共蒸发干燥)和DMAP(0.339g，2.8mmol)的无水吡啶(30mL)溶液中，并搅拌直至完全转化。接下来，用甲醇(10mL)猝灭反应混合物，并减压浓缩。将获得的残余物溶于DCM中并用水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度

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[0560]

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洗脱：0％至2.5％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为灰白色固体的中间体A21(2.1g，收率：

1

68％)。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.75(s,1H),8.52(s,1H),8.48(s,1H),7.19-7.28(m,5H),7.11-7.16(m,4H),6.76-6.81(m,4H),6.41(t,J＝6.0Hz,1H),5.43(d,J＝4.9Hz,1H),4.40(quin,J＝5.2Hz,1H),3.98-4.05(m,1H),3.72(s,6H),3.13(dd,J＝10.4,2.7Hz,1H),3.08(dd,J＝10.4,5.5Hz,1H),2.69-2.79(m,1H),2.40-2.49(m,1H)。ESI-MS：m/z 553.1[M+H]+。

[0564]实施例32：中间体A22的合成

[0565]

步骤1：将2N NaOH水溶液和1,4-二氧杂环己烷(1:1，132mL)的混合物添加到中间体25b(6.6g，11.6mmol)中。将所得溶液在室温下搅拌10分钟，之后加热至110℃保持3小时。接下来，将反应混合物冷却至室温，用2N HCl水溶液中和并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至7％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为灰白色粉末的中间体32a(1.6g，收率：51％)。ESI-MS：m/z 291.9[M+Na]+。[0567]步骤2：将DMAP(0.36g，2.9mmol)添加到中间体32a(1.6g，5.9mmol，使用前通过与无水甲苯和无水吡啶共蒸发干燥)的无水吡啶(24mL)溶液中，接着分批加入DMTrCl(3.2g，9.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌4小时，之后用甲醇(20mL)猝灭并减压浓缩。将获得的残余物溶于EtOAc中并用水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％至1％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为灰紫色泡沫的中间体A22

1

(2.7g，收率：80％)。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.10(br s,1H),7.93(s,1H),7.32-7.39(m,2H),7.19-7.30(m,7H),7.13(d,J＝2.1Hz,1H),6.84(dd,J＝9.0,6.2Hz,4H),6.48-6.55(m,1H),5.34(d,J＝4.8Hz,1H),4.29-4.37(m,1H),3.87-3.94(m,1H),3.73(s,6H),3.15(dd,J＝10.3,6.2Hz,1H),3.11(dd,J＝10.3,4.1Hz,1H),2.42-2.50(m,1H),2.25(ddd,J＝13.4,6.5,4.1Hz,1H)；ESI-MS：m/z 570.1[M-H]-。[0568]实施例33：中间体A23的合成

[0566]

[0569]

步骤1：在-5℃和惰性气氛下，将TMSCl(10.6mL，83.3mmol)滴加到8-氮杂-7-脱氮杂-2'-脱氧腺苷(33a，3.0g，11.9mmol，CAS：17318-21-7)的无水吡啶(47.6mL)溶液中。将所得反应混合物在-5℃下搅拌2小时。滴加苯甲酰氯(1.39mL，11.9mmol)，并在室温下继续搅拌1.5小时。接下来，将反应溶液冷却至0℃，之后加入水(1.0mL)和氨水(20mL)。将所得混合物在0℃下搅拌30分钟，并在室温下再搅拌2小时。通过添加6M HCl水溶液将溶液的pH调节

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[0570]

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至6至7，之后继续搅拌10小时。将混合物部分浓缩(至多50mL)，产生中间体33b的沉淀，通过过滤收集沉淀，用水洗涤并在高真空下干燥(4.37g，收率：定量)。ESI-MS：m/z 356.1[M+H]+。

[0571]步骤2：在10℃和惰性气氛下，将DMTrCl(4.03g，11.9mmol)添加到中间体33b(4.37g，11.9mmol)的吡啶/DMF溶剂混合物(1/2，48mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜，之后加入DCM和固体NaHCO3(3.0g)。将所得混合物搅拌10分钟，随后用水洗涤。用DCM反萃取水相。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗制产物通过硅胶色谱法(洗脱梯

1

度：0％至5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到纯的中间体A23(4.18g，收率：53％收率)。H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 11.69(br s,1H),8.79(s,1H),8.42(s,1H),8.01-8.13(m,2H),7.61-7.70(m,1H),7.49-7.59(m,2H),7.22-7.33(m,2H),7.09-7.17(m,7H),6.61-6.80(m,5H),5.36(d,J＝4.7Hz,1H),4.46-4.60(m,1H),3.88-3.99(m,1H),3.67(s,3H),3.65(s,3H),3.05(dd,J＝10.0,4.1Hz,1H),2.98(dd,J＝10.0,6.4Hz,1H),2.79-2.89(m,1H),2.29-2.42(m,1H)；ESI-MS：m/z 658.6[M+H]+。[0572]实施例34：中间体A24的合成

[0573]

步骤1：将异丁酸酐(6.19g，39.15mmol)滴加到8-氮杂-2'-脱氧鸟苷(34a，CAS：4546-73-0，2.1g，7.83mmol)的无水二甲基乙酰胺(DMAc，60mL)的溶液中。将反应混合物在140℃下搅拌2小时，之后冷却至室温，然后加入水(20mL)和NaOH(4.38g，109.61mmol)。将所得混合物再搅拌2小时，之后用6M HCl溶液将pH调节至7。将所得溶液真空浓缩，并将残余物通过制备型反相HPLC纯化以得到中间体34b(1.37g，收率：52％)。ESI-MS：m/z 339.0[M+H]+。

[0575]步骤2：在0℃下，将DMTrCl(1.51g，4.45mmol)的无水吡啶(5.0mL)溶液添加到中间体34b(1.37g，4.05mmol)的无水吡啶(20.0mL)溶液中。将反应混合物在5℃下搅拌12小时，然后用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：20％至80％EtOAc的庚烷溶液)纯化，得

1

到为白色固体的中间体A24(1.65g，收率：64％)。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.18(br s,1H),12.05(br s,1H),7.22-7.26(m,2H),7.14-7.21(m,3H),7.12(dd,J＝8.9,3.0Hz,4H),6.77(d,J＝9.2Hz,2H),6.71-6.75(m,2H),6.48(dd,J＝7.1,3.4Hz,1H),5.43(d,J＝5.0Hz,1H),4.56-4.64(m,1H),3.98-4.02(m,1H),3.71(s,3H),3.70(s,3H),3.07-3.12(m,1H),2.98-3.06(m,2H),2.80(spt,J＝6.9Hz,1H),2.44-2.50(m,1H),1.14(d,J＝6.9Hz,3H),1.14(d,J＝6.9Hz,3H)；ESI-MS：m/z 641.1[M+H]+。[0576]实施例35：中间体A25的合成

[0574]

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[0577]

中间体A25使用如针对中间体A11的制备所举例说明的程序，由35a(CAS：95087-1

12-0)制得。H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 12.30(br s,1H),8.15(s,1H),8.08(s,1H),7.31(d,J＝7.2Hz,2H),7.21-7.15(m,7H),6.79(d,J＝9.0Hz,2H),6.75(d,J＝9.0Hz,2H),6.55(dd,J＝6.6,3.6Hz,1H),5.32(d,J＝4.8Hz,1H),4.56-4.52(m,1H),3.94(q,J＝5.4Hz,1H),3.71(s,3H),3.71(s,3H),3.06(dd,J＝3.6,10.2Hz,1H),3.00(dd,J＝6.6,10.2Hz,1H),2.77-2.74(m,1H),2.35-2.30(m,1H)；ESI-MS：m/z 553.1[M-H]-。[0579]实施例36：化合物49至59的合成[0580]使用实施例1至36中所述的程序、试剂和中间体制备化合物49至57。

[0578]

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生物学实施例

[0593]体外测试[0594]实施例1[0595]STING SPA结合测定[0596]人STING SPA结合测定法测量标记为2',3'cGAMP(环状(鸟苷-(2'->5')-单磷酸-腺苷-(3'->5')-单磷酸)的氚向生物素化STING蛋白的位移。重组STING的可溶性型式在缺乏四个跨膜结构域的大肠杆菌(E.coli)中表达，并且含有在232位处具有R(H232R)的Q86WV6的残基139-379。基于58％的群体的等位基因频率，H232R被认为是野生型(Yi等人，“Single 20Nucleotide Polymorphisms of Human STING can affect innate immune response to cyclic dinucleotides”PLOS ONE.2013,8(10),e77846)。STING构建体具有N末端HIS标签，随后为TEV蛋白酶裂解位点和AVI标签，以允许通过BirA生物素连接酶进行定向生物素酰化(Beckett等人，A minimal peptide substrate in biotin holoenzyme synthetase-catalyzed biotinylation.(1999)Protein Science 8,921-929)。在纯化之后和在生物素酰化之前裂解HIS标签。

[0597]通过在测定缓冲液中加入8nM[3H]-2’3’-cGAMP和40nM生物素-STING蛋白，在1536孔板中以每孔8μL的总体积进行测定[25mM HEPES(Corning 25-060-C1)pH 7.5，150mM NaCl(Sigma S5150)，0.5mg/mL BSA(Gibco 15260-037)，0.001％Tween-20(Sigma P7949)，分子级水(Corning 46-000-CM)]。用声学分配器(EDC生物系统)在100％DMSO中加入测试化合物(80mL)，最终测定浓度为1％DMSO。将平板离心1分钟，并且在室温下温育60分钟。最后，加入(2μL)聚苯乙烯链霉亲和素SPA珠粒(PerkinElmer RPNQ0306)，密封板并在室温下离心1分钟。使平板暗适应2小时，并且在ViewLux(Perkin Elmer)上读取12分钟/平板。[3H]-2’3’-cGAMP的饱和结合曲线显示与STING结合的KD为3.6nM±0.3nM，与天然配体的报告值相当(Zhang等人，Cyclic GMP-AMP containing mixed phosphodiester linkages is an endogenous high-affinity ligand for STING(Molecular Cell 2013 51(2):10.1016/j.molcel.2013.05.022.))。

[0598]包括环状di-GMP的其它天然配体也在该测定中返回预期范围内的值。参考化合物为cGAMP，结果以抑制百分比和IC50值报告。与小鼠STING的结合使用一种类似于上述含有Q3TBT3的残基138-378的的构建体。[0599]全长人STING结合测定

[0600]在HEK293-EXPI细胞中重组表达来自在232位(H232R)处具有R的Q86WV6的残基1-379的人STING，该232位具有H232RN末端6HIS标签，随后为FLAG标签、TEV蛋白酶裂解位点和用于生物素酰化HEK293的AVI标签。由这些细胞制备纯化的膜，并通过免疫印迹来确认和量化STING表达。将包含STING的膜与测试化合物在Greiner 384孔测定板中混合，并且在室温下在用于STING SPA结合测定的同一测定缓冲液中温育一小时。接下来，加入[3H]-2’3’-cGAMP，并且将平板在室温下温育30分钟。将反应转移至预洗涤的Pall 5073滤板上，并且将每个孔用50μL测定缓冲液洗涤3次。将滤板在50℃下干燥1小时。向每个孔中加入10μL Microscint闪烁流体，密封板并在TopCount(Perkin Elmer)上读取1分钟/孔。[0601]STING SPR结合测定[0602]在S200 biacore SPR仪器(GE Healthcare)上分析化合物。经由生物素捕获(GE 

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Healthcare#BR100531)将大肠杆菌产生的截短的STING蛋白固定在S系列链霉亲和素芯片上。在运行缓冲液(10mM HEPES，pH7.4,150mM NaCl，0.005％P20,1mM TECEP)中以100μM至0.195μM的1:2稀释度筛选化合物。使用1:1结合模型进行稳态亲和力和动力学评估(STING被视为二聚体)。运行参数如下：60秒开，300秒关，环状-二-GMP(60秒开/60秒关)，硫醇异构体1(60秒开/300秒关)和cGAMP(60秒开/1200秒关)，其中流速为50μL/min且数据采集频率为40Hz，温度为25℃。

[0603]STING人细胞报告基因测定

[0604]通过干扰素调节因子(IRF)诱导型SEAP报告构建体的稳定整合，在来源于人THP1单核细胞系的THP1-ISG细胞(Invivogen,cat#thp-isg)中评估人STING途径的激动。THP1-Blue ISG细胞在ISG54最小启动子的控制下与五个干扰素(IFN)刺激的应答元件联合表达分泌的胚胎碱性磷酸酶(SEAP)报告基因。因此，THP1-Blue ISG细胞允许通过确定SEAP的活性来监测IRF活化。用碱性磷酸酶检测介质(即SEAP检测试剂)容易地评估细胞培养上清液中IRF诱导的SEAP的水平。这些细胞对Zeocin具有抗性。2’3’cGAMP在本测定中用作阳性对照。为了进行测定，将60,000个细胞以30μL/孔分配到白色不透明的底部组织培养物处理过的384孔板中。[0605]以10μL(1％DMSO最终浓度)的体积加入测试化合物。最初在100％DMSO中制备化合物，点样在中间稀释板上，标签然后在转移前在培养基中稀释。将分析物在37℃、5％CO2下温育24小时，然后将平板以1200rpm(120x g)离心5分钟。在最终温育之后，将90μL碱性磷酸酶检测培养基-底物加入新的384孔透明板的每个孔中，并且使用Biomek FX将10μL细胞上清液从测定板转移至新的碱性磷酸酶检测培养基平板上，并混合4次。将平板在RT下温育20分钟，然后在Tecan Safire2上测定655nm处的吸光度。[0606]STING小鼠细胞报告基因测定

[0607]通过稳定整合干扰素诱导型Lucia荧光素酶报告构建体，在来源于小鼠RAW-264.7巨噬细胞系的RAW Lucia细胞(Invivogen，目录号rawl-isg)中评估小鼠STING途径的激动。RAW Lucia细胞在ISG54最小启动子的控制下与五种干扰素(IFN)刺激的应答元件联合表达分泌的荧光素酶报告基因。因此，RAW Lucia细胞允许通过确定荧光素酶的活性来监测IRF活化。用荧光素酶检测试剂QUANTI-LucTM容易地评估细胞培养上清液中IRF诱导的荧光素酶水平。这些细胞对Zeocin具有抗性。2’3’cGAMP在本测定中用作阳性对照。为了进行测定，将100,000个细胞以90μL/孔分配到透明平底组织培养物处理过的96孔板中。以10μL的体积加入测试化合物。将测定在37℃、5％CO2下温育24小时和48小时。温育后，将来自测定板的20μL细胞上清液转移至新的96uL孔白板上，并且加入50uL QUANTI-Luc底物。将平板在RT下温育，摇动5分钟，然后在EnVision 2104上以0.1秒的积分时间读取发光。[0608]人干扰素β诱导测定

[0609]THP1-双重细胞(Invivogen，目录号thpd-nfis)用于测量在STING途径激活后IFN-β向培养上清液中的分泌。THP1-双重细胞系类似于THP1-Blue ISG，但具有两个稳定整合的报告基因以同时测量IRF和NFkB途径活性。IRF活性由分泌的Lucia荧光素酶在ISG54和五个干扰素刺激的响应元件的控制下监测，并且NFkB活性由SEAP在融合至五个NFkB响应元件和三个拷贝的c-Rel结合位点的IFN-β最小启动子的控制下监测。为了进行该测定，将抗IFN-β

捕获抗体涂在96孔多阵列板(Mesoscale Discovery)上。温育一小时后，洗涤平板，并且将

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来自STING人细胞报告基因测定平板或IFN-β标准物的50μL上清液与涂布板中的20μL磺基

标签缀合检测抗体混合。将平板温育，振荡2小时，洗涤，并且施用读缓冲液。在SectorImager上测量电化学发光。[0610]STING细胞信号传导途径评估[0611]通过磷酸化STING(S366)、磷酸化TBK1(S172)和磷酸化IRF3(S396)的蛋白质印迹在THP1 BLUE ISG或THP1-双重细胞中测量STING途径的激动。在化合物添加到培养基六小时后或电穿孔1小时后测量蛋白质变化。对于电穿孔，将90μL核转染缓冲液中的5百万个细胞与10μL测试化合物混合。将这些混合物使用程序V-001在Amaxa Nucleofector(Lonza)上电穿孔。将细胞转移到具有新鲜培养基的12孔板中，并使其在37℃、5％CO2下复原一小时。以下适用于电穿孔和直接化合物添加方法两者：细胞随后在冷HBSS中洗涤并在RIPA缓冲液中裂解。将样品进行总蛋白归一化，并且在蛋白质简单样品缓冲液或LDS加载缓冲液中稀释。样品在95℃下热变性5分钟，然后使用PeggySue(ProteinSimple)测量磷酸和总STING和IRF3，同时使用NuPAGE(Invitrogen)系统测量TBK1。分别使用Compass或Licor Odsey软件分析数据。

[0612]STING体内活性[0613]就所有研究而言，雌性Balb/c小鼠得自查尔斯河实验室(Charles River Labs)(马萨诸塞州威尔明顿(Wilmington，MA))，并且当它们在6至8周龄时使用且体重大约20g。在实验使用之前，允许所有动物适应环境并从任何与运输相关的压力中恢复至少5天。随意提供反渗透氯化水和经照射的食物(实验室可高压消毒的啮齿动物饮食5010，实验室饮食)，并且将动物在12h光照和黑暗循环中保持不变。使用前对笼子和寝具进行高压消毒，标签每周更换一次。所有实验都根据《实验室动物护理和使用指南(The Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)》进行，并得到了宾夕法尼亚州春天之家Janssen R&D机构动物护理和使用委员会(Institutional Animal Care and Use Committee of Janssen R&D,Spring House,PA)的批准。每个实验组含有8只小鼠。通过将500,000个CT26结肠癌肿瘤细胞皮下植入Balb/c小鼠并使肿瘤建立到100mm3至300mm3来确定小鼠CT26肿瘤模型的体内功效。

[0614]将化合物以0.1mL/注射的体积在磷酸盐缓冲盐水中在瘤内注射配制。每三天给小鼠施用0.05mg，总共三剂。当所有对照动物仍在研究时，如根据下式：((C-T)/(C))*100，通过治疗肿瘤体积(T)相对于对照肿瘤体积(C)的尺寸减小而计算出的肿瘤生长抑制百分比(TGI)来测量功效。将治愈定义为在施用最后一剂后，检测到在10个肿瘤体积倍增时间(TVDT)下没有可测量肿瘤的动物数量。[0615]所得数据示于表3中。

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人IFN-β排序值由在THP-1细胞中测试的剂量范围(0.78uM至50uM)内的总累积

IFN-β诱导确定的排序值确定。

[0619]*IC50和EC50为至少三个值的平均值。[0620]生物学实施例2

[0621]STING原代人PBMC细胞因子诱导测定

[0622]在来源于人全血的原代人外周血单核细胞(PBMC)中评估人STING途径的激动性。

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将1品脱(大约420mL)新鲜供体血液(AllCells Inc.,Alameda,CA)在淋巴细胞分离培养基(1.077g/mL至1.080g/mL，Corning,Manassas,VA)上分层，然后在室温下以500g离心20分钟而不施加破碎。收获在血清和淋巴细胞分离培养基之间的界面处收集的PBMC，洗涤，然后计数。PBMC由淋巴细胞和单核细胞(诸如B细胞、T细胞等)的亚型构成，并且这些亚型已在文献中表征为表达不同水平的STING蛋白。响应于STING激动剂，诸如2’3’-cGAMP，这些细胞被激活并且被诱导以表达多种促炎和抗病毒细胞因子。另外，在用STING激动剂刺激时，这些细胞上调激活标记。细胞因子诱导水平可通过多种方法测量，包括ELISA、Luminex和MSD。激活标记上调的水平可通过流式细胞术测量。[0623]为了进行测定，可将1,000,000个细胞分配到225μL/孔的平底组织培养物处理过的96孔板中。可在10x浓度下以25μL的体积加入测试化合物。可将一些化合物溶于100％DMSO中，并且在接受这些化合物的培养物中DMSO的最终浓度可为1％。可将测定在37℃、5％CO2下温育48小时。可收获200μl上清液，而不干扰平板底部的细胞，然后在-20℃下冷冻直至Luminex测量的时间。按照制造商的方案，可使用来自MILLIPLEX MAP人细胞因子/趋化因子磁珠面板-免疫多重测定试剂盒的G-CSF、IFNα2、IFNγ、IL-1b、IL-6、IL-10、IL-12(p40)、IL-12(p70)、TNFa以及来自MILLIPLEX MAP人细胞因子/趋化因子磁珠面板IV试剂盒(EMD Millipore,Billerica,MA)的IFNβ1分析物进行Luminex测定。可使用Luminex FlexMAP仪器(Luminex Corporation,Radnor,PA)测量细胞因子诱导。可使用MILLIPLEX Analyst软件(EMD Millipore)对收集的Luminex数据进行分析。

[0624]使用来自STING激活的原代人PBMC的条件培养基抑制PHH细胞中的HBV病毒[0625]原代人肝细胞可感染乙型肝炎病毒，并且在建立的感染期间，将产生可通过ELISA检测的病毒蛋白，诸如HBsAg和HBeAg。用化合物诸如恩替卡韦进行的治疗处理可抑制HBV繁殖，这可通过降低的病毒蛋白产量来测量。可将(细胞数)4×105个细胞/孔原代人肝细胞(BioReclamation,Westbury,NY)分配到500μL/孔的平底组织培养物处理过的24孔板中。24h后，用30moi至75moi的HBV感染细胞。第二天，可将PHH洗涤3次，并可将新鲜的维持培养基加入到细胞中。同时，可如前所述分离PBMC。为了刺激PBMC，可将10,000,000个细胞分配到400μL/孔的平底组织培养物处理过的24孔板中。可以100μL的体积加入测试化合物，然后可将培养物在37℃、5％CO2下温育48小时。可收获上清液。可使用流式细胞术测量细胞的激活标记上调。简而言之，细胞可用针对CD56、CD19、CD3、CD8a、CD14、CD69、CD54、CD161、CD4和CD80的荧光标记抗体进行染色。可在Attune NxT流式细胞计((Thermo Fisher,Carlsbad,CA)上分析样品

[0626]如前文所述，从受刺激的PBMC培养物中，可保留一部分上清液用于Luminex的细胞因子检测。可将剩余的上清液分成两半，并且可将一份等分试样储存在4℃下以用于测定的d8上。可将另一份上清液等分试样用2X PHH培养基以1:1稀释，然后可加入到d4感染的PHH细胞中。96h后，可更换用过的培养基，并可用2X PHH培养基以1:1的稀释度加入上清液。此时，可使用HBsAg ELISA试剂盒(Wantai Bio-pharm,Beijing,China)进行HBsAg的临时测量。96h后，可收集培养基并可测量HBsAg。

[0627]尽管上述说明通过提供的实施例用于说明目的来指出了本发明的原理，但应当理解，本发明的实践涵盖以下权利要求书及其等同形式的范围内的一般变型形式、改变形式和/或修改形式。

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