F-7000荧光分光光度计操作规程和注意事项(含原理图)

1、开机：

（1）开启计算机。

（2）开启仪器主机电源。按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮（POWER）。同时，观察主机正面面板右侧的Xe LAMP 和RUN指示灯依次亮起来，都显示绿色。 2、计算机进入Windows XP视窗后，打开运行软件。 （1）双击桌面图标（FL Solution 2.1 for F-7000）。主机自行初始化，扫描界面自动进入。 （2）初始化结束后，须预热15-20分钟，按界面提示选择操作方式。 3、测试模式的选择：波长扫描（wavelength scan） （1） 点击扫描界面右侧“Method”。 （2） 在“General”选项中的“Measurement”选择“wavelength scan”测量模式。 （3） 在“Instrument”选项中设置仪器参数和扫描参数。

主要参数选项包括：

① 选择扫描模式“Scan Mode”：Emission/Excitation/Synchronous（发射光谱、激发光谱和

同步荧光）。

② 选择数据模式“Data Mode”：Fluorescence/Phosphprescence/Luminescence(荧光测量、磷

光测量、化学发光)。 ③ 设定波长扫描范围。

A、 扫描荧光激发光谱(Excitation)：需设定激发光的起始/终止波长（EX Start/End WL）

和荧光发射波长（EM WL）;

B、 扫描荧光发射光谱(Emission)：需设定发射光的起始/终止波长（EM Start/End WL）

和荧光激发波长（EX WL）;

C、 扫描同步荧光（Synchronous）：需设定激发光的起始/终止波长（EX Start/End WL）

和荧光发射波长（EM WL）。

④ 选择扫描速度“Scan Speed”（通常选240nm/min）。 ⑤ 选择激发/发射狭缝（EX/EM Slit）。 ⑥ 选择光电倍增管负高压“PMT Voltage”（一般选700V）。 ⑦ 选择仪器响应时间“Response”（一般选Auto）。

⑧ 选择“Report”设定输出数据信息、仪器采集数据的步长（通常选0.2nm）及输出数据

的起始和终止波长（Data Start/End）。

（4）参数设置好后，点击“确定”。 4、设置文件存储路径

（1）点击扫描界面右侧“Sample”。 （2）样品命名“Sample name”。 （3）选中“□Auto File”， 打√。可以自动保存原始文件和TXT格式文本文档数据。 （4）参数设置好后，点击“OK”。 5、扫描测试

（1）打开盖子，放入待测样品后，盖上盖子。（请勿用力）。 （2）点击扫描界面右侧“Measure”（或快捷键F4），窗口在线出现扫描谱图。 6、数据处理

（1）选中自动弹出的数据窗口。 （2）选择“Trace”，进行读数并寻峰等操作。 （3）上传数据。

7、关机顺序（逆开机顺序实施操作）：

（1）关闭运行软件FL Solution 2.1 for F-7000，弹出窗口，如图6。 （2）选中“○Close the lamp，then close the monitor windows？”，打“⊙”。 （3）点击“Yes”。窗口自动关闭。同时，观察主机正面面板右侧的Xe LAMP指示灯暗下来，而RUN指示灯仍显示绿色。

（4）约十分钟后，关闭仪器主机电源，即按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮（POWER）。（目的是仅让风扇工作，使Xe灯室散热）。 （5）关闭计算机。

注意事项

（1） 注意开机顺序。步骤1-（2）若是未先开主机，则程序会抓取不到主机讯号。 （2） 注意关机顺序。

（3） 为延长仪器使用寿命，扫描速度、负高压、狭缝的设置一般不宜选在高档。 （4） 关机后必须半小时（等氙灯温度降下）方可重新开机。

仪器原理

荧光产生原理： 荧光物质分子吸收了特定频率辐射后，由基态跃迁至第一电子激发态（或更高激发态）的任一振动能级，在溶液中这种激发态分子与溶剂分子发生碰撞，以热的形式损失部分能量后，而回到第一电子激发态的最低振动能级（无辐射跃迁）。然后再以辐射形式去活化跃迁到电子基态的任一振动能级，便产生荧光。由于无辐射跃迁的几率大，因此分子荧光波长常常比激发光长。激发光源的波长通常是在紫外区，荧光也可能在紫外区，但更多是在可见区。相对于基态和激发态两个最低振动能级之间的跃迁所产生的荧光称为共振荧光，此时吸收光谱与荧光光谱重叠。 （1）荧光光谱的形状和激发光波长无关，这是因为荧光的产生是由第一电子激发态的最低振动能级开始的而和荧光物质分子原来被激发至哪一个能级无关；（2）荧光光谱的形状和吸收光谱的形状十分相似，且互为镜像。因为吸收光谱反映的是第一电子激发态的能级分布情况；而荧光光谱反映的是基态能级的分布情况，而基态中能级的分布和第一电子激发态中的能级分布是相类似的，所以荧光光谱的形状与吸收光谱十分相似。又因为在相当于由基态中最低振动能能及跃迁到第一电子激发态各振动能级而显示的荧光峰中，基态的振动能级越高，则两个能级的差距越小，即荧光波长越长。所以前后两者不但形状相似而且互为镜像。