月季快繁技术的研究概况

目 录

1月季快繁无菌培养的起始 ............................................................................................................ 3

1.1 外植体的选取 .................................................................................. 错误！未定义书签。 1.2外植体消毒 ......................................................................................... 错误！未定义书签。 1.3 无菌体系建立 .................................................................................. 错误！未定义书签。 1.4培养基 ................................................................................................. 错误！未定义书签。 2诱导外植体生长分化，增殖培养物 ............................................................ 错误！未定义书签。

2.1 接种 .................................................................................................... 错误！未定义书签。

2.2诱导芽的分化 ....................................................................................................................... 4 2.3继代增殖 .............................................................................................. 错误！未定义书签。

3培养物的壮苗生根与试管苗移栽 ................................................................ 错误！未定义书签。

3.1生根培养 .............................................................................................. 错误！未定义书签。 3.2移栽 ...................................................................................................... 错误！未定义书签。

4 影响月季快繁进展的因素 ........................................................................... 错误！未定义书签。

4.1 芽在茎段上的位置对生长的影响 ..................................................... 错误！未定义书签。 4.2BA对茎段萌发的影响 .......................................................................... 错误！未定义书签。 4.3 生长素对月季生根的影响 ................................................................................................. 5 4.4活性炭对生根的影响 ........................................................................................................... 5 4.5褐变 ...................................................................................................................................... 5 4.6玻璃化 .................................................................................................................................. 5 5展望 ................................................................................................................................................ 5 参考文献 ........................................................................................................................................... 6

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月季快繁技术的研究概况

摘 要：组织培养繁殖植物的技术是一种特殊的营养繁殖方式,现在一般称为快速繁殖技术

(Rapid propagation)或微繁殖技术(Micropropa-gation)。目前在国外已经有了标准化的采后技术,通过细心操作、良好的环境管理以及应用保鲜剂等措施使损失率大大降低。本文就月季快繁的基本技术流程作一综述。 关键词： 月季；组织培养；快繁

月季Rosa chinensisJacq.为蔷薇科蔷薇属植物,是世界栽培种类较多的多年生木本花卉之一[1]。月季是蔷薇属的木本花卉，有“花中皇后”的美誉，深受人们的喜爱。为我国十大名花之一，在我国有30多个城市将其选为市花。 月季除种类繁多，用途也很广，可供室内陈设，庭院美化，作切花，还可从月季中提取香料，花朵、花瓣用于腌制食品或药用，商品价值较高[2]。月季通常采用扦插、嫁接和压条繁殖，但是一些名贵品种扦插不易生根，主要靠芽接繁殖，而芽接速度慢，因而造成优良品种的月季苗供不应求[3]。应用组织培养技术进行月季花卉的繁殖育种，可大大缩短其增殖周期,快速繁殖优良品种,并保留与母株相同的优良遗传特性和表型特性。同时，月季组培和遗传转化系统的建立也是体细胞克隆变异育种和基因工程育种的重要前期工作[4]。

1月季快繁无菌培养的起始

1.1 外植体的选取

芽的快速繁殖与供试材料的基因型有关，同时还与外植体的取材部位有关，来源于枝条中部的侧芽的繁殖速率最快 [5] 。

从田间或盆栽的植株上，选取健壮的当年生枝条，无病虫害，用饱满而未萌发侧芽作为外植体。侧芽又以枝条中段的为好，摘除叶片和嫩刺。幼嫩的枝条有利于诱导植株的芽分化，植株过成熟会让后面的实验很难进行。

1.2外植体消毒

植物材料表面要经过一系列冲洗、酒精升汞的消毒，使外植体无菌。消毒过程一定要注意规范操作，避免染菌。消毒后，用一定浓度的抗生素如庆大霉素、氨卞青霉素等处理外植体，可以减少接种后的污染。如果外植体带菌，杂菌就会感染植株，污染培养基，导致实验失败。

1.3 无菌体系建立

除了让外植体无菌外，培养基也要充分灭菌，还要做好操作环境的消毒灭菌，保持操作环境的无菌，才能让实验顺利进行。

1.4培养基

MS、B5 和 WPM 培养基适用于木本植物组织培养，不同的外植体所选用的培养基不同，通常来说适合大多数木本植物外植体接种的培养基是 MS 培养基。初代培养基中的无机盐浓度是影响外植体褐变的原因之一，有些植物在接种培养基中生长产生可能是由于无机盐浓度偏高，所以适当降低无机盐浓度可以减少褐变现象的产生[6]。

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2诱导外植体生长分化，增殖培养物

2.1 接种

于冰沁在外植体的接种中采用了垂直接种，斜向上45°接种，水平接种和反转接种4种方式，发现垂直接种和斜向上45°接种是最佳的接种方式，腋芽、再生芽数量多，且生长健壮，这可能与植物的生长极性有关[7]。

2.2诱导芽的分化

添加不同浓度的BA和NAA的MS培养基上进行起始培养，增加适量NAA有利离体侧芽分化，但浓度过高会仅诱导大量愈伤组织，不利于侧芽的直接分化和生长[8]。因此要选择适当的浓度比例进行培养，让芽更好的分化。

2.3继代增殖

将诱导培养基上已经萌发的嫩芽转入附加6-BA、NAA等激素的MS培养基中，进行增殖继代。低浓度的6 一BA有利于不定芽的增殖， 浓度过高则抑制不定芽增殖，适量 N A A有利于芽和 叶生长[9]，但浓度过高诱导产生大量愈伤组织，不利于侧芽的直接分化和生长[8] 。在NAA浓度相同而BA浓度不同的培养基中，随BA浓度的升高，芽苗的增殖系数也相应提高。在BA浓度相同而NAA浓度不同的培养基中，随NAA浓度升高，小芽生长速度加快，继代所需时间对增殖系数也有一定的影响[7]。

3培养物的壮苗生根与试管苗移栽

诱导外植体获得的芽需要进一步培养增殖，才能发挥快速繁殖的优势。当材料增殖到一定数量后，还需要进行壮苗与生根。

3.1生根培养

生根要将原来培养基中的大量元素减半(既1/2MS),并去除BA进行根的诱导[10]，多数试验采用的培养基为1/2 MS[11,12](大量元素减半)。因为无菌芽苗在分化与增殖培养基中只诱导地上部分，既不断地分枝增殖，曾多次出现现蕾、开花现象,但均不易生根。生根时，只需用生长素IBA即可，IBA浓度为0.5mg/L对生根是较为适宜的浓度，而不必向在诱导植物芽的分化时必须按一定比例配比细胞分裂素与生长素混合使用[13]。

Skirvin等[14]在用“Forever yours”月季做生根试验时发现，采用1/4MS培养基，不加生长素即可以促进生根。

3.2移栽

生根苗移栽时间的选择[8]很重要，过早或过晚都不利于再生苗的成活。锻炼时间与移栽成活率有关，炼苗7 d以上，成活率达到95%[11]。影响移栽成活率的主要因素有3个：湿度、温度以及基质种类和带菌量[15,16]。

移栽前进行短期的开瓶炼苗，可以增加幼苗对外界环境的适应能力，但在开瓶期间往往容易滋生杂菌，反而不利于幼苗的生长。采用将再生苗直接移栽入栽培基质的方法，取得了较好的效果。这样操作,不仅省去炼苗的麻烦，而且减少了污染,提高了成活率。

4 影响月季快繁进展的因素

月季组织培养技术的影响因素有很多，主要有：外植体及继代培养过程中易产生褐变现象；接种过程中易产生污染，控制污染率极其重要；组织培养过程中出现的玻璃化现象。

4.1 芽在茎段上的位置对生长的影响

芽在茎段上的位置对不定芽诱导和生长有不同影响，在枝条中部的带芽茎段，通常在接

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种后的第5天左右就会萌发,而基部和梢部的茎段，芽的萌发要在11～13天才开始，中部茎段芽的诱导率(48%)也要高于基部和梢部的茎段(36%)[1]。

4.2BA对茎段萌发的影响

腋芽萌发培养中，添加适量的BA可促进芽的生长[2]。生芽试验表明，具有细胞分裂素活性的6-BA可有效地诱导芽的萌发，一定的生长素与细胞分裂素进行适当的配比，对月季器官的分化有很大的影响[8]。

4.3 生长素对月季生根的影响

月季芽诱导生根需要一定质量浓度的生长素,质量浓度过低(如0.1 mg·L-1)，生根的诱导率低，但质量浓度过高(如1.0 mg·L-1)，往往在根与芽之间会形成较多的愈伤组织，不利于植株的生长[1]。

4.4活性炭对生根的影响

活性炭有利于生根的原因：在于其可以吸附切口表面释放的酚类物质，防止苗发生褐化；加入活性炭后就可以让苗在一个模拟土壤的暗环境中进行根的发端与发育[17]。

4.5褐变

褐变是指在进行组织培养时，外植体自身分化出褐色的物质并且影响培养基，导致外植体也会受褐色物质的影响严重致死的现象[18]。褐变产物会使外植体、培养基等褐变，影响外植体的生长和分化，褐变现象严重会使外植体死亡。

影响褐变的原理复杂因素很多，植物种类、基因型和外植体等是影响褐变的主要因素。截至到目前防止褐变的方法主要有：

（1）对外植体的母枝进行遮阴处理或对外植体材料进行适当的暗培养； （2）可降低培养基中的生长素浓度和蔗糖浓度；

（3）向组织培养所需的培养基中添加褐变抑制剂与吸附剂；常见的抑制剂有：抗坏血酸(Vc)，植酸(PA)等[19]；褐变抑制剂对外植体材料影响严重。

4.6玻璃化

玻璃化现象是指在培养过程中培养一段时间后外植体材料呈半透明、水浸状，组织结构发育畸形的现象。

玻璃化的原因：

(1)琼脂和蔗糖浓度对玻璃化现象产生影响，琼脂和蔗糖浓度低，硬度差，玻璃化现象发生较严重。

(2)6-BA浓度对玻璃苗的影响，提高6-BA浓度可使促进芽的分化，有研究表明培养基中的6-BA浓度对玻璃化的影响显著，6-BA浓度和玻璃苗产生率呈正相关。 (3)培养瓶内空气湿度和通气条件对玻璃化的影响。培养瓶中的空气湿度大，培养瓶口密封过严，致使瓶内空气与外界气体交换不畅，而且当瓶内丛生芽较多时不能及时更换培养基，也会产生玻璃化现象。

克服植物组织培养中试管苗玻璃化现象发生，常见措施有： (l)增加培养基的硬度；

(2)提高培养基中的蔗糖浓度；

(3)改善培养瓶与外界环境的通气条件； (4)适当降低培养基中生长素的浓度；

(5)改善培养瓶的温度，昼夜有一定的温差[20,21]

5展望

在深入研究月季生长发育的基础上，掌握月季开花所需要的有效积温，加上适当的修

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剪措施和药物处理,就可以使月季按预期开花。但目前来讲，仍然存在着许多问题。我国大部分地区冬季温度低、日照时间短，在月季花期调控生产过程中，由于温度或日照管理不当，会产生大量的盲花枝或畸形花。但大型现代化双层面玻璃温室长期使用费用昂贵，因此应加强月季发育过程中开花机理的研究及早培育出生育时间短、花期早的品种,减少生产费用。

参考文献

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