栓皮栎栲胶的提取工艺技术研究

尹艺凝;张文辉;甄学渊;赵菡

【摘 要】采用单因素试验和L9(34)正交试验相结合,Folin-Denis分光光度法方法测定单宁含量,利用优化的栓皮栎橡碗栲胶提取工艺,对秦岭北坡4种类型栓皮栎的橡碗、树皮、叶片和枝条的单宁含量进行了测定和差异分析.结果表明:1)提取温度对栓皮栎橡碗单宁提取的影响程度最大,其次是料液比和乙醇体积分数,提取时间对单宁提取的影响程度最小.2)乙醇提取厚皮深裂型栓皮栎橡碗单宁的适宜工艺为体积分数70％乙醇溶液,料液比为1∶15,在80℃条件下提取4h.3)秦岭北坡4种类型栓皮栎各器官的单宁含量存在显著或极显著差异,4种类型栓皮栎均为橡杭单宁含量最高(15.686％～15.895％),其次是树皮(8.743％～9.274％)和叶片(6.549％～7.151％),枝条(4.515％～4.925％)中单宁含量最低.4)橡杭、树皮、叶片和枝条的单宁含量均以厚皮深裂型栓皮栎最高,薄皮浅裂型的最低.秦岭北坡厚皮深裂型栓皮栎的橡杭、树皮、叶片是提取栲胶的良好工业原料. 【期刊名称】《西北林学院学报》 【年(卷),期】2014(029)004 【总页数】6页(P182-187)

【关键词】栓皮栎;单宁;乙醇提取工艺;器官 【作 者】尹艺凝;张文辉;甄学渊;赵菡

【作者单位】西北农林科技大学林学院,西部环境与生态教育部重点实验室,陕西杨陵712100;西北农林科技大学林学院,西部环境与生态教育部重点实验室,陕西杨陵712100;西北农林科技大学林学院,西部环境与生态教育部重点实验室,陕西杨陵

712100;西北农林科技大学林学院,西部环境与生态教育部重点实验室,陕西杨陵712100

【正文语种】中 文

【中图分类】S713;TQ351.01

栲胶是我国重要的工业生产原料，主要成分是单宁，有较强的生理活性，一种天然可再生资源，具有抗皱、预防心血管疾病、抗病毒和防腐等生理功能［1－4］，广泛存在于栎类植物的橡碗、树皮、树叶、枝条和果实等器官中［1－2］。栲胶是我国重要的林业化工产品之一，橡碗、树皮栲胶是我国栲胶的主要类型，主要涉及鞣皮制革领域逐渐扩大到医药、食品、石油化工、塑料制品等领域［2，5－6］，具有巨大的开发潜力和经济价值。

栓皮栎（Quercus variabilis）为壳斗科栎属落叶乔木，是重要的栲胶、软木和能源树种［7－8］，秦巴山区是其分布的核心区，每年可产大量栲胶，但由于长期未被开发或栲胶加工过程较粗放，导致没有充分合理利用栓皮栎栲胶原料，造成资源过度浪费，影响栓皮栎森林多功能的利用。由于分布区土壤、气候、空间位置等条件的复杂性，张文辉、周建云和任耀忠等［9－12］以栓皮栎树皮厚度和开裂程度为依据，将栓皮栎天然类型进行聚类分析划分为：厚皮深裂、厚皮浅裂、薄皮深裂、薄皮浅裂4种类型，并已经在表型、分子和遗传特征等方面深入研究。目前，针对橡碗栲胶的提取国内已有研究，但仍未有公认的适合于所有树种的栲胶提取工艺技术，特别是以乙醇作为提取剂的条件下提取温度、料液比等方面都还没有最佳设置区间，导致橡碗栲胶的提取工艺随意性大，资源利用率不高。而栲胶提取技术优化对高效利用资源、保护资源和区域经济发展是亟需解决的问题。

为充分利用栓皮栎栲胶资源，实现经济效益持续增长，探明秦岭北坡4种类型栓

皮栎各器官单宁含量，为栓皮栎资源合理开发和高效利用，研究栓皮栎木考胶提取最佳工艺提供依据。 1 材料与方法 1．1 研究区概况

研究区域选择在陕西省周至县楼观台。秦岭北坡是栓皮栎种群分布的核心区域，栓皮栎林主要分布在800～1 400 m［13］。秦岭北坡属暖温带半湿润大陆性季风气候，年平均气温10℃，年降水量600 mm，1月平均气温－7℃，7月平均气温22℃，年无霜期190 d［14］，土壤以棕壤为主。地带性植被为暖温带落叶阔叶林，栓皮栎是当地地带性植被建群种，占林地乔木层80%以上，伴生树种有侧柏（Platycladus orientalis）、油松（Pinus tabulaeformis）、槲树（Quercus dentata）等；主要灌木树种有野蔷薇（Rosa multiflora）、鼠李（Rhamnus davurica）、黄栌（Cotinus coggygria）、达乌里胡枝子（Lespedeza davurica）、黄刺玫（Rosa xanthina）；主要草本植物有苔草（Carex

tristachya）、披碱草（Elymus dahuricus）和长芒草（Stipa bungeana）等。 1．2 材料

2012年9月在秦岭北坡周至县楼观台实验林场，选择阳坡生境，林相均一，郁闭度为0．85的栓皮栎林（栓皮栎占80%以上），该林地从20世纪50年代以来未经任何管理措施，属于天然恢复形成的近成熟林。以4种类型［10－12］（厚皮深裂、厚皮浅裂、薄皮深裂、薄皮浅裂）生长良好，干形通直，圆满，整枝性良好，平均胸径为20 cm栓皮栎个体为对象，选择标准株后分别按器官采样，采集树高1．3 m处一块长10 cm、宽10 cm的树皮（采样至周皮形成层）、树冠上部阳面橡椀、叶片和基部直径≤2 cm枝条。每个类型选择6株标准木进行生态学和生物学上的重复器官采样，将采集到不同部位的材料分别置于硅胶袋中保存，标记后带回实验室。

1．3 方法

1．3．1 试剂与仪器 试剂：单宁酸标准品、钨酸钠（天津市天力化学试剂有限公司）；磷酸、磷钼酸、无水碳酸钠（四川西陇化工有限公司）等均为分析纯、无水乙醇（西安三浦化学试剂有限公司）、蒸馏水。

仪器：FW135植物粉碎机、H H－6数显恒温水浴锅（图华电器有限公司）、R－1001旋转蒸发仪、SHB－Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）、日本岛津UV－1800紫外光分光光度、TG16－W微量高速离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）、SB－5200超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）、筛网（孔径60 mm）、AUY220电子分析天平。

1．3．2 样品处理 将4种类型栓皮栎不同器官样品洗净去杂，室内阴风干燥处理至恒重，粉碎后过60 mm筛网，4℃冰箱密闭保存备用［15－16］。选择厚皮深裂型栓皮栎橡碗作为橡碗单宁提取工艺优化的样品。

1．3．3 单宁含量的测定 采用Folin－Denis比色法，用分光光度计进行栓皮栎各器官单宁含量的测定［17－19］。Folin－Denis试剂制备：准确称取10 g钨酸钠，2 g磷钼酸溶于20 m L蒸馏水中，加入250 m L回流瓶中，再加入5 m L磷酸，用电热套加热回流2 h，冷却，加蒸馏水定容至100 m L容量瓶中。单宁酸标准曲线：用移液管精确吸取0．1 mg·m L－1单宁酸标准溶液0．0、1．0、2．0、3．0、4．0、5．0 m L，分别置于25 m L容量瓶中，分别加入1 m L的F－D显色剂和1 mol·L－1的碳酸钠溶液5 m L，再加入60%乙醇定容至刻度线，室温静置30 min后，4 000 r·min－1离心10 min，在760 nm处测定吸光度以吸光度（y）对单宁酸浓度（x）回归，得出回归方程为：y＝72．250x＋0．008 5，相关系数R 2＝0．999 6。

1．3．4 提取试剂的选择 称取2．0 g厚皮深裂型栓皮栎橡椀样品，用蒸馏水、60%乙醇、60%甲醇、60%的丙酮、60%乙醚／乙醇。在相同条件下，70℃浸浸

4 h，抽滤得到滤液，60℃减压浓缩，定容至500 m L，吸取1 m L滤液，测定方法同1．3．3，得到60%乙醇、60%甲醇、60%丙酮、60%乙醚／乙醇提取单宁含量相近，蒸馏水提取单宁含量偏低，考虑到成本及安全性，本试验选择乙醇作为提取剂效果最佳。

1．3．5 栓皮栎橡椀单宁最佳提取工艺的单因素试验

1．3．5．1 提取温度的确定 称取2．0 g厚皮深裂型栓皮栎橡椀样品，按m（橡椀）∶V（乙醇）＝1∶20，加入体积分数60%乙醇40 m L，分别于60℃、70℃、80℃、90℃回流提取4 h，抽滤得到滤液，60℃减压浓缩，定容至500 m L，待测，确定橡椀单宁提取的最佳温度。

1．3．5．2 提取时间的确定 称取2．0 g厚皮深裂型栓皮栎橡碗样品，按m（橡椀）∶V（乙醇）＝1∶20，加入体积分数60%乙醇40 m L，70℃分别回流提取3、4、5、6 h，测定同1．4．1，确定橡椀单宁提取的最佳时间。

1．3．5．3 乙醇体积分数的确定 称取2．0 g厚皮深裂型栓皮栎橡碗样品，按m（橡椀）∶V（乙醇）＝1∶20，分别加入体积分数50%、60%、70%、80%乙醇40 m L，70℃回流提取4 h，测定同1．4．1，确定乙醇提取橡椀单宁提取的最佳体积分数。

1．3．5．4 提取料液比的确定 称取2．0 g厚皮深裂型栓皮栎橡椀样品，选用体积分数60%乙醇，按料液比（m／V）分别为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25于70℃回流提取4 h，测定同1．4．1，确定橡椀单宁提取的最佳料液比。 1．3．6 栓皮栎橡椀单宁提取工艺的正交试验 为了深入系统的优化乙醇恒温水浴浸提法的工艺参数，根据单因素试验的结果及其对实验的影响，以提取温度、提取时间、提取液乙醇体积份数和料液比为4个试验因素，每个因素设置3个水平，以提取单宁含量为考察指标，选用L9（34）正交试验设计栓皮栎橡椀单宁提取的最佳工艺方案（表1）。

表1 栓皮栎橡椀单宁提取工艺优化的L9（34）正交试验因素水平Table 1 Factors and levels of orthogonal experiment L9（34）on extracting tannins from the valonea of Q．variabilis处理因素提取温度／℃A提取时间／h B乙醇体积分数／%C料液比D 1 70 3 60 1：10 2 70 4 70 1：15 3 70 5 80 1：20 4 80 3 70 1：20 5 80 4 80 1：10 6 80 5 60 1：15 7 90 3 80 1：15 8 90 4 60 1：20 9 90 5 70 1：10

1．3．7 秦岭北坡4种类型栓皮栎不同器官单宁含量的测定 按照优化的栓皮栎橡椀栲胶提取最佳工艺，对秦岭北坡4种类型栓皮栎的橡椀、树皮、枝条、叶片进行单宁含量测定，记录平均值。 1．4 数据处理

采用Excel 2007进行数据的初步计算及处理，DPS7．05软件对橡碗单宁提取工艺试验结果进行极差分析，SPSS 13．0软件进行单因素方差分析，Origin 8．5软件绘图。 2 结果与分析

2．1 栓皮栎橡椀提取工艺的单因素试验

2．1．1 提取温度对单宁提取效果的影响 随着温度的升高，单宁提取量增加，在80℃达到最大值，与其他处理条件的差异达到显著水平，当温度升高至90℃时，单宁的提取量与80℃时的相比下降0．83%，说明在一定范围内提高温度有助于单宁物质的析出，但是温度过高，酚类化合物易发生氧化反应，因此提取温度80℃最为适宜（表2）。

表2 不同温度对栓皮栎橡椀单宁提取量的影响Table 2 Effect of different temperatures on the extraction of tannins from the valonea of Q．variabilis注：数据后标不同小写字母表示差异显著（p＜0．05），表3～表5同。提取温度／℃单宁提取率／%提取温度／℃单宁提取率／%60 14．621d 80 15．898a

70 15．241c 90 15．766b

2．1．2 提取时间对单宁提取效果的影响 不同提取时间下栓皮栎橡椀单宁提取量存在显著差异。提取时间为3 h时，橡碗单宁提取量最低，随着提取时间的延长，单宁的提取量逐渐增加，在4 h达到极大值，但继续延长提取时间，单宁提取量反而有下降的趋势，这可能是由于在长时间的高温下单宁发生了降解、缩合、氧化等化学反应，而使单宁测定值下降。因此栓皮栎橡椀单宁最适宜时间为4 h（表3）。 表3 不同时间对栓皮栎橡椀单宁提取量的影响Table 3 Effect of different extraction times on the extraction of tannins from the valonea of Q．variabilis提取时间／h单宁提取率／%提取时间／h单宁提取率／%3 14．833d 5 15．848b 4 15．887a 6 15．784c

2．1．3 乙醇体积分数对单宁提取效果的影响 随着乙醇体积分数的增加，栓皮栎橡椀单宁提取量显著增加，橡碗中单宁被充分提取出来，单宁含量增加的速率比较快，当乙醇体积分数达到70%时，单宁提取量达到峰值，当乙醇体积分数增加至80%时，单宁提取量下降0．65%，因此，选择体积分数为70%的乙醇提取栓皮栎橡椀单宁较为适宜（表4）。

2．1．4 提取料液比对单宁提取效果的影响 不同料液比处理下栓皮栎橡椀单宁提取量存在显著差异，当料液比为1∶10时，单宁提取量最低，单宁提取量随着料液比的增大而增加，当料液比在1∶20以下时，增幅明显，料液比超过1∶20后，增幅缓慢，趋于稳定，这可能是因为乙醇溶剂已将单宁完全溶出，考虑到成本和提取速率，选择料液比为1∶20对橡椀单宁进行提取最适宜（表5）。

表4 乙醇体积分数对栓皮栎橡椀单宁提取量的影响Table 4 Effect of different concentrations of ethanol on the extraction of tannins from the valonea of Q．variabilis乙醇体积分数／%单宁提取率／%乙醇体积分数／%单宁提取率／%50 14．855d 70 15．887a 60 15．560c 80 15．784b

表5 不同料液比对栓皮栎橡椀单宁提取量的影响Table 5 Effect of different ratios of material to solvent on the extraction of tannins from from the valonea of Q．variabilis料液比单宁提取率／%料液比单宁提取率／%1∶10 14．679d 1∶20 15．848a 1∶15 15．370c 1∶25 15．851b 2．2 栓皮栎橡椀单宁提取工艺的正交试验

在单因素试验的基础上，以提取温度、提取时间、乙醇体积分数和料液比为试验因素，采用正交试验对栓皮栎橡碗单宁的提取工艺条件进行优化。极差分析得到影响栓皮栎橡椀单宁提取效果的因素主次顺序为：提取温度＞料液比＞乙醇体积分数＞提取时间（表6）。栓皮栎橡椀单宁提取的最佳工艺为：A2 B2 C2 D2，即提取温度80℃、提取时间4 h，乙醇体积分数70%、料液比1∶15。

表6 栓皮栎橡碗单宁提取工艺的L9（34）正交试验Table 6 Orthogonal experiment L9（34）on the extraction of tannins from the valonea of Q．variabilis处理因素提取温度／℃A提取时间／h B乙醇体积分数／%C料液比D单宁提取率／%1 70 3 60 1∶10 15．240 2 70 4 70 1∶15 15．648 3 70 5 80 1∶20 15．534 4 80 3 70 1∶20 15．970 5 80 4 80 1∶10 15．761 6 80 5 60 1∶15 15．838 7 90 3 80 1∶15 15．557 8 90 4 60 1∶20 15．416 9 90 5 70 1∶10 15．432 K 1 46．422 46．767 46．494 46．433 K2 47．569 46．825 47．050 47．043 K3 46．405 46．804 46．852 46．920 k1 15．474 15．589 15．498 15．478 k2 15．856 15．608 15．683 15．681 k3 15．468 15．601 15．617 15．640 R 0．388 0．019 0．185 0．203 2．3 秦岭北坡4种类型栓皮栎各器官单宁含量

秦岭北坡同一类型栓皮栎的不同器官中单宁含量明显不同（图1），方差分析表明，同一类型栓皮栎不同器官之间单宁含量存在显著差异。秦岭北坡4种类型栓皮栎的各器官单宁含量从高到低变化趋势皆表现为：橡椀＞树皮＞叶片＞枝条，这可能

是由于植物不同器官的作用各不相同，导致其在自身的代谢和次生代谢产物积累的过程中，不同器官组成物质在种类和含量上均存在着一定的差异。通过对比可以发现，橡椀、树皮、叶片含量明显高于枝条，且各器官便于大量采收，对树木的损害性较小，可见栓皮栎橡椀、树皮、叶片是获得单宁的良好材料，可以高效利用于工业化生产。

秦岭北坡4种类型栓皮栎同一器官中单宁含量明显不同（图1）。单因素方差分析表明，秦岭北坡4种类型的橡碗中单宁含量存在显著差异，其中厚皮深裂型橡椀单宁含量最高，厚皮深裂型橡椀与薄皮深裂型、薄皮浅裂型橡椀均达到显著差异，但与厚皮浅裂型无显著差异；秦岭北坡4种类型栓皮栎树皮、叶片和枝条单宁含量差异均达到极显著水平（P＜0．01）。秦岭北坡4种类型栓皮栎中橡碗、树皮、叶片、枝条单宁含量大小均表现为：厚皮深裂型＞厚皮浅裂型＞薄皮深裂型＞薄皮浅裂型，不同类型栓皮栎各器官组单宁含量的差异可能与其进化适应性相关，厚皮深裂型栓皮栎各器官的单宁含量均为最高，说明秦岭北坡厚皮深裂型栓皮栎是生产栲胶原料的主要首选类型，应加以重点培育和开发利用。

图1 栓皮栎不同器官单宁含量差异分析Fig．1 Tannin content in different organs of Q．variabilis注：图中不同大写字母表示同一类型不同器官间差异极显著（p＜0．01），图中不同小写字母表示不同类型同一器官间差异显著（p＜0．05）。 3 结论与讨论

试验以乙醇溶剂提取栓皮栎橡椀栲胶具有良好的渗透作用，有助于提取橡椀单宁，并提高了单宁的提取量，提取最佳工艺为体积分数为70%乙醇，提取温度为80℃，料液比为1∶15，提取时间为4 h，可提取高达15．89%的橡椀栲胶。很多研究表明乙醇作为提取剂得到的单宁含量较高，文赤夫［20］等提取百部中单宁认为乙醇为最佳提取溶剂。谭文英［21］等提取板栗壳中单宁时也认为乙醇作为溶剂

浸提效果最好，最佳工艺条件为30%体积分数的乙醇，提取温度95℃，提取时间6 h，测得板栗壳中单宁达13．4%。李学强［22］等得到欧李果皮中单宁提取最佳工艺为乙醇浓度30%提取温度60℃，料液比1∶30，提取时间4 h。但不同的研究所选用的试剂不同得到的最佳工艺也不尽相同，李鹏［15］等对柿叶单宁的提取技术进行优化得到最佳工艺条件是以含1．2%盐酸的无水甲醇为提取溶剂，提取温度70℃，料液比1∶12，提取时间40 min，提取2次，柿叶单宁提取量可达14．89 mg·g－1。王立峰［19］等研究了菜籽壳中单宁的提取方法，选择提取剂为加入1%盐酸的丙酮溶液、提取温度65．48℃，料液比为1∶20，提取时间67．11 min为最佳提取工艺，单宁提取量可高达9．15 mg·g－1。不同研究学者的结论各不相同，造成这种差异可能是由于试验材料不同引起的，本试验中最佳提取工艺与其他文献的不同之处也可能是由于试验材料不同等原因造成。 秦岭北坡4中类型栓皮栎橡椀单宁含量最高（15．686%～15．895%），其次是树皮（8．743%～9．274%）和叶片（6．549%～7．151%），枝条

（4．515%～4．925%）中单宁含量最低。栓皮栎不同器官单宁含量不同已有学者所证明，郭利勇［23］等认为栓皮栎橡椀、树皮单宁含量分别达17%～27%、6．2%～10．6%，是重要的工业原料。周元［24］认为栎属植物壳斗和树皮单宁含量可高达11．5%～18．6%，是提取栲胶的重要原料。J．M．Favre［25］等对欧洲栓皮槠（Quercus suber）的研究也认为其树皮、叶片的单宁含量较高分别为8．3%、7．2%。王文杰［26］等对兴安落叶松不同器官的单宁含量进行分析得出兴安落叶松各器官单宁含量从高到低分别为树皮（11．5%）、针叶（5．1%）和树枝（4．0%）。本研究的结果与上述研究结果基本一致，橡椀、树皮、叶片单宁含量均较高，枝条中单宁含量相对较低。不同学者的研究结果不尽一致的现象说明栓皮栎不同器官单宁含量的高低是一个复杂的问题，有待进一步深入研究。 秦岭北坡厚皮深裂型栓皮栎是4种类型中最为优良的生产栲胶类型。任耀忠［27］

等对4种类型栓皮栎的栓皮的优良性、速生性和抗旱性的进行分析，其综合优良性为：厚皮深裂型＞厚皮浅裂型＞薄皮深裂型＞薄皮浅裂型，厚皮深裂型栓皮栎应作为栲胶、软木等生产利用的首选类型。白超［28］等在对栓皮栎软木生长及其特性研究中也认为厚皮类型栓皮栎软木优于薄皮类型。本研究结果与上述学者研究结论一致，秦岭北坡4种类型栓皮栎的橡椀、树皮、叶片、枝条单宁含量均处于较高水平，其单宁含量高低顺序依次为：厚皮深裂型、厚皮浅裂型、薄皮深裂型、薄皮浅裂型，秦岭北坡厚皮深裂型栓皮栎各器官单宁含量明显高于其他3个类型，可能是由于其自身遗传和进化适应性有关关，其作用机理还有待进一步深入研究。因此，本研究也认为厚皮深裂型栓皮栎是4种类型中最为优良的类型，应作为重要资源经济树种的首选类型进行重点培育和高效利用。

【相关文献】

［1］ 孙达旺．栲胶生产工艺学［M］．北京：中国林业出版社，1995：1－33．

［2］ 宋立江，狄莹，石碧．植物多酚研究与利用的意义及发展趋势［J］．化学进展，2000，12（2）：161－170．SONG L J，DI Y，SHI B．The significance and development trend in research of plant polyphenols［J］．Progress in Chemistry，2000，12（2）：161－170．（in Chinese）

［3］ LV L，LIU S W，JIANG S B，et al．Tannin inhibits HIV－1 entry by targeting gp41［J］．Acta Pharmacol Sin．，2004，25（2）：213－218．

［4］ AKIYAMA H，FUJII K，YAMASAKI O，et al．Antibacterial action of several tannins against Staphylococcus aureus［J］．Journal of Antimicrobial Chemotherapy，2001，48（4）：487－491．

［5］ 王体科．栲胶生产发展动向［J］．世界林业研究，1997（1）：36－42．

［6］ 张国春，王书民，任有良，等．栲胶应用研究综述［J］．商洛学院学报，2006，20（4）：41－45．

［7］ 周建云，林军，何景峰，等．栓皮栎研究进展与未来展望［J］．西北林学院学报，2010，25（3）：43－49．ZHOU J Y，LIN J，HE J F，et al．Review and perspective on Quercus variabilis research［J］．Journal of Northwest Forest University，2010，25（3）：43－

49．（in Chinese）

［8］ 吴明作，刘玉萃，姜志林．栓皮栎种群生殖生态与稳定性机制研究［J］．生态学报，2001，21（2）：225－230．WU M Z，LIU Y C，JIANG Z L．The reproductive ecology and stable mechanism of Quercus variabilis（Fagaceae）population［J］．Acta Ecologica Sinica，2001，21（2）：225－230．（in Chinese）

［9］ 张文辉，卢志军，李景侠，等．陕西不同林区栓皮栎种群空间分布格局及动态的比较研究［J］．西北植物学报，2002，22（3）：476－483．ZHANG W H，LU Z J，LI J X，et al．A comparative study on spatial distribution pattern and its dynamics of Quercus variabilis populations among dif ferent forest areas in Shaanxi Proviance，China［J］．．Acta Botanica Boreali－Occidentalia Sinica，2002，22（3）：476－483．（in Chinese） ［10］ 周建云，曹旭平，张宏勃，等．陕西栓皮栎天然类型划分研究［J］．西北林学院学报，2009，24（1）：16－19．ZHOU J Y，CAO X P，ZHANG H B，et al．Classification of natural types of Quercus variabilis in Shanxi Province［J］．Journal of Northwest Forest University，2009，24（1）：16－19．（in Chinese）

［11］ 周建云，郭军战，杨祖山，等．栓皮栎天然群体过氧化物酶同工酶遗传变异分析［J］．西北林学院学报，2003，18（2）：33－36．ZHOU J Y，GUO J Z，YANG Z S，et al．Variation of peroxidase isozyme on natural populations of Quercus variabilis［J］．Journal of Northwest Forestry University，2003，18（2）：33－36．（in Chinese）

［12］ 任耀忠．栓皮栎4个不同类型遗传测定及其评价［D］．杨陵：西北农林科技大学，2009． ［13］ 张文辉，卢志军，李景侠，等．秦岭北坡栓皮栎种群动态的研究［J］．应用生态学报，2003，14（9）：1427－1432．ZHANG W H，LU Z J，LI J X，et al．Population dynamics of Quercus variabilis on northern slope of Qinling Mountains［J］．Chinese Journal of Applied Ecology，2003，14（9）：1427－1432．（in Chinese）

［14］ 易青春，张文辉，唐德瑞，等．采伐次数对栓皮栎伐桩萌苗生长的影响［J］．西北农林科技大学学报：自然科学版，2013，41（4）：147－154．YI Q C，ZHANG W H，TANG D R，et al．Effects of cutting frequency on sprout growth of Quercus variabilis stump

［J］．Journal of Northwest A ＆F University：Natural Science Edition，2013，41（4）：147－154．（in Chinese）

［15］ 李鹏，张海生，牛国霞．柿叶单宁提取技术研究［J］．食品工业科技，2009（9）：220－222．

［16］ 官昭瑛，赵颖，董晓立．蒲桃和人面子叶片单宁含量与凋落物分解速率及底栖动物定殖的关系［J］．应用生态学报，2009，20（10）：2493－2498．GUAN Z Y，ZHAO Y，DONG X L．Relationship of syzygium jambos and leaf tannin concentration and leaf litter breakdown with the colonization of benthonic invertebrates［J］．Chinese Journal of Applied Ecology，2009，20（10）：2493－2498．（in Chinese）

［17］ 武予清，郭予元．棉花植株中的单宁测定方法研究［J］．应用生态学报，2000，11（2）：243－245．WU Y Q，GUO Y Y．Determination of tannin in cotton plant［J］．Chinese

Journal of Applied Ecology，2000，2（11）：243－245．（in Chinese）

［18］ VIEIRA M C，LELIS R C C，SILVA B C，et al．Tannin extraction from the bark of Pinus oocarpa var．oocarpa with sodium carbonate and sodium bisulfite［J］．Floresta E Ambiente，2011，18（1）：1－8．

［19］ 王立峰，鞠兴荣，袁建，等．菜籽壳中单宁提取技术研究［J］．食品科学，2006，27（12）：364－370．

［20］ 文赤夫，刘栋华，于祖春．百部中单宁的提取工艺优化［J］．宜宾学院学报，2006，6（6）：37－39．

［21］ 谭文英，方桂珍．板栗壳中栲胶的提取工艺［J］．东北林业大学学报，2006，34（2）：60－61．TAN W Y，FANG G Z．Extraction technology of vegetable tannin extract from Chinese chestnut shell［J］．Journal of Northeast Forestry University，2006，34（2）：60－61．（in Chinese）

［22］ 李学强，李秀珍．成熟欧李果皮果肉中单宁提取条件的的优化［J］．生物学通报，2009，44（2）：46－48．LI X Q，LI X Z．Extraction process of tannin acid from ripe pulp of Prunus humilis［J］．Bulletin of Biology，2009，44（2）：46－48．（in Chinese） ［23］ 郭利勇，周洲，郭豫光．河南省栎树资源的综合开发利用［J］．安徽农业科学，2008，36（5）：1830－1831．

［24］ 周元．云南栎属植物资源及开发利用［J］．广西植物，2001，21（4）：330－334． ［25］ FAVRE J M，SCALLBERT A，HERVE D．Quercus spp．（Oak）：In Vitro Culture and production of tannins［J］．Biotechnology in Agriculture and Forestry，1993，24：300－312．

［26］ 王文杰，祖元刚，李雪莹．兴安落叶松单宁含量的器官差异与季节变化［J］．林产化学与工业，2007，27（2）：81－84．

［27］ 任耀忠，张文辉，周建云．栓皮栎不同变异类型的优良性分析［J］．中南林业科技大学学报，2013，33（6）：60－63．REN Y Z，ZHANG W H，ZHOU J Y．Superiority analyses on different variant types of Quercus variabilis［J］．Journal of Central South University of Forestry ＆Technology，2013，33（6）：60－63．（in Chinese）

［28］ 白超，张文辉，雷亚芳．秦岭北坡2种类型栓皮栎软木生长及特性［J］．林业科学，2013，49（4）：62－69．BAI C，ZHANG W H，LEI Y F．Growth and characteristics of cork from two types of Quercus variabilis in North Slopes Qinling Mountains［J］．Scientia Silvae Science，2013，49（4）：62－69．（in Chinese）