维普资讯 http://www.cqvip.com ２００８年７月第１ ５卷第７期 中国中医药信息杂志 ・４９・ ＨＰＬＣ法测定增食颗粒中柚皮苷 和橙皮苷的含量 郭朝晖 ，魏舒畅 ，欧阳晓玫 （１．甘肃省药品检验所，甘肃兰州７３００００；２．甘肃中医学院药学院，甘肃兰州７３００００） 摘要：目的建立增食颗粒中柚皮苷和橙皮苷的含量测定方法。方法／／＝１．９８９ ６×１０６ 一１．采用ＨＰＬＣ法，Ｋｒｏｍａｓ ｉ １ Ｃｌ８柱，以乙腈一水一 磷酸（２０：８０：０．０２）为流动相，流速１．０ ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长２８３ ｎｌｌｌ，柱温３５℃，进样量２０ 。结果柚皮苷回归方程为： ２４３×１０ ，，＝０．９９９ ９，线性范围为０．１７８ ５～０．８９２ ５ 。橙皮苷回归方程为：／／＝１．９６４ ９× １０６Ｘ一１．０１５×１０ ，，＝０．９９９ ９，线性范围为０．０７３６ ８～０．３６８ ４ ｌａｇ。柚皮苷平均回收率为９７．２４％，ＲＳＤ＝１．２１％。橙皮苷 平均回收率为９６．９５％，ＲＳＤ＝１．４９＊／，。结论中图分类号：Ｒ２８４．１ 方法简便、准确，重复性好，可作为增食颗粒的质量控制方法。 文章编号：１００５．５３０４（２００８）０７．００４９．０２ ， 关键词：增食颗粒；高效液相色谱法；枳实；柚皮苷；橙皮苷 文献标识码：Ａ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎａｒｉｎｇｉｎ ａｎｄ Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ ｉｎ Ｚｅｎｇｓｈｉ Ｋｅｌｉ ｂｙ ＨＰＬＣ ＧＵＯ Ｚｈａｏ－ｈ１ｌｉ‘，ＷＥＩ Ｓｈｕ－ｃｈａｎｇ２ＯＵＹＡＮＧ Ｘｉａｏ．ｍｅｉ ．Ｇａｎｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００００ Ｃｈｉｎａ￣２．Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆＧａｎｓｕ ＴＣＭＣｏｌｌｅｇｅ，Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｎａｎｎｇｍ ａｎｄ Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ ｉｎ Ｚｅｎｇｓｈｉ Ｋｅｌｉ ｂｙ ＨＰＬＣ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃｚｓ ｃｏｌｕｍｎ ｗｉｔｈ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ—ｗａｔｅｒ－ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ ｆ２０： ８０：０．０２）ａｓ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ．Ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ １．０ ｍＬ／ｍｉｎ，ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｖｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２８３ ｎｍ．ｔｈｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ｃｏｌｕｍｎ ｉｓ ３５℃．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅ ｗｅｒｅ ｌｉｎｅａｒ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．１７８ ５～０．８９２ ５ ｌａｇ ｆｏｒ Ｎａｒｔｎｇｈａ ａｎｄ ０．０７３ ６８～０．３６８ ４ ；ｆｏｒ Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ（ｒ＝０．９９９ ９）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９７．２４％（ＲＳＤ＝１．２ １％）ａｎｄ ９６．９５％（ＲＳＤ＝１．４９％）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｚｅｎｇｓｈｉ Ｋｅｌｉ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｚｃｎｇｓｈｉ ＫｅＵ；ＨＰＬＣ：Ｆｒｕｃｔｕｓ Ａｕｒａｎｔｉｉ Ｉｍｍａｔｕｒｕｓ；Ｎａｒｉｎｇｉｎ；Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ 增食颗粒系由全国名老中医于己百教授的经验方“于氏增 食煮散”演化而来，由砂仁、枳实、鸡内金、焦三仙、连翘、 乙腈一水一磷酸（２０：８０：０．０２）；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长： ２８３ ｎｍ；柱温：３５℃；进样量：２Ｏ 。对照品、样品及阴性 蒲公英等组成，经多年临床应用，对于治疗ｄ，Ｊｈ厌食症具有很 对照色谱图见图１。 好的疗效。但原剂型味觉差、服用体积大、携带不方便。根据 本方的用途，将剂型改为颗粒剂，不仅方便服用，还能提高制剂 的稳定性。为有效控制药品质量，本试验参照相关文献 ，以 枳实中的柚皮苷和橙皮苷为质控成分，采用ＨＰＬＣ法进行了含 量测定方法的研究。结果表明，该法操作简便、快速、重现性 好，可用于其质量分析。 １仪器与试药 Ａ 高效液相色谱仪，Ｗａｔｅｒｓ ５１５泵，２４８７紫外检测器，７１７自 动进样器，Ｅｍｐｏｗｅｒ色谱工作站（Ｗａｔｅｒｓ公司）；ＫＱ－２５０Ｂ超声 波清洗器（昆山超声仪器公司）；ＡＥ２０４可变量程电子天平（瑞 士梅特勒公司）。柚皮苷（批号０７２２－２００１０８）和橙皮苷（批号 ０７２１—９９０９）对照品由中国药品生物制品检定所提供；增食颗粒 Ｂ 剂由甘肃中医学院药学院提供。乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯， 水为超纯水。 ２方法与结果 ２．１色谱条件 色谱柱：Ｋｒｏｍａｓｉ１ Ｃｌ８（１５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５ ）；流动相： 基金项目：甘肃省教育厅资助课题【甘科鉴字２００７（０８０号）】 Ｃ ｔ／ｍｉｎ 注：Ａ．样品；Ｂ．对照品；Ｃ．缺枳实阴性对照 图１增食颗粒ＨＰＬＯ色谱图 维普资讯 http://www.cqvip.com
・５０・ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａ１ ｏｆ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｎ ＴＣＭ Ｊｕ１．２００８ ＶＯ１．１ ５ Ｎｏ．７ ２．２对照品溶液的制备 表２橙皮苷加样回收率试验结果（ｎ＝６） 精密称取柚皮苷和橙皮苷对照品适量，加甲醇制成含柚皮 苷３５．７００ ｇｇ／ｍＬ和橙皮苷１４．７３６ ｇｇ／ｍＬ的对照品混合溶液。 ２．３供试品溶液的制备 取本品１０袋，研细，精密称取约０．２ ｇ，置２５ ｍＬ容量瓶中， 加甲醇２０ ｍＬ，超声处理４０ ｍｉｎ，放冷，加甲醇定容，摇匀，经 ０．４５ ｐａｎ微孔滤膜滤过，即得。 ２．４线性关系考察 精密吸取柚皮苷和橙皮苷对照品混合溶液５．０、１０．０、１５．０、 ２０，０、２５．０ ｇＬ，进样，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为 纵坐标、含量（ ｇ）为横坐标绘制标准曲线。柚皮苷回归方 程为：ｊ，＝１．９８９ ６×１０。 一１．２４３×１０。，，＝０．９９９ ９，线性范围 为０．１７８ ５～０．８９２ ５ ｇ；橙皮苷回归方程为：ｙ＝１．９６４ ９× １０。 一１．２．１０样品测定 取不同批号的样品，分别按“２．３”项下方法制备供试品溶 液，按上述色谱条件测定，按外标法，用峰面积计算样品含量， 结果见表３。 表３增食颗粒中柚皮苷和橙皮苷的含量测定结果（ｎ＝５） ０１５×１０ ，，＝０，９９９ ９，线性范围为０．０７３６ ８～ ０．３６８ ４ ｇｇ。结果表明，柚皮苷和橙皮苷进样量与峰面积呈良 好线性关系。 ２．５阴性对照试验 取去枳实的阴性制剂，按“２，３”项下方法制备供试液，按 上述色谱条件测定。结果阴性对照溶液在与橙皮苷和柚皮苷相 同保留时间处，无色谱峰出现。 ２．６精密度试验 精密吸取对照品溶液２０ ，重复进样，按上述色谱条件测 定，测得柚皮苷峰面积的ＲＳＤ＝１．０３％（／７：５），橙皮苷峰面积的 ＲＳＤ＝Ｏ．５７％（／７＝５）。 ２．７稳定性试验 ３讨论 ３．１色谱条件的选择 在２８３、２８６、２８８ ｎｍ处，以甲醇一水一磷酸及乙腈一水一磷酸 为流动相系统的分离效果进行了考察，结果表明：３个波长的 分离效果接近，在２８３ ｎｌｌｌ处，灵敏度较高；以甲醇一水一磷酸为 流动相，峰形差，柚皮苷和橙皮苷的分离效果不理想。通过对 比，确定以２８３ ｎｌｌｌ为检测波长，以乙腈一水一磷酸（２ｏ：８０： 取同一份供试品溶液，在６ ｈ内不同时间进样，测得柚皮 苷峰面积的ＲＳＤ＝０．８６％（／７—６），橙皮苷峰面积的ＲＳＤ＝１．７５％ （／７＝６），供试品溶液在６ ｈ内基本稳定。 ２．８重复性试验 精密称取同一份样品５份，分别按上述方法制备和测定， 柚皮苷含量的ＲＳＤ＝１．５７％，橙皮苷含量的ＲＳＤ＝Ｏ．８４％。 ２．９加样回收率试验 ｏ．０２）为流动相系统，待测组份保留适中，柚皮苷和橙皮苷的分 离度大于２。但应注意酸的浓度增加，柚皮苷和橙皮苷的分离 度会下降，酸浓度以ｏ．０２～０．０４较理想。 ３．２提取方法的确定 采用甲醇超声提取的方法，样品处理简单，误差小。通过对 ２０、４０、６０ ｍｉｎ等不同提取时间的考察，以甲醇超声提取较理 想。 取已知含量的样品约０．２ ｇ，精密称取６份，分别准确加入 对照品溶液适量，按样品测定方法提取、测定，计算回收率，结 果见表１、表２。 表１ 柚皮苷加样回收率试验结果（／／＝６） 参考文献： ［１］付超美，邹亮，钱妍，等．ＨＰＬＣ测定健脾消食颗粒中橙皮苷的含量［＿Ｔ＿． 华西药学杂志，２００４，１９（４）：２９９． （２］丁桂兰，薛亚光，邢春来，等．ｔｔＰＬＣ测定橘红丸中柚皮苷、橙皮苷的含 量［Ｊ］．中成药，２００４，２６（９）：７０７． ［３］崔宇宏，常海萍，史宪海．对枳壳中柚皮苷含量测定方法的改进［Ｊ］．中 国药品标准，２００５，６（１）：４６． ［４］杨武亮，杨世林，张敏，等．ＲＰ—ＨＰＬＣ法测定枳壳中柚皮苷和新橙皮菅的 含量［Ｊ］．中药新药与临床药理，２００５，１６（４）：２６１． （收稿日期：２００７－１卜１４，编辑：陈静） 一