一种用于鉴定未知基因序列的连接片断PCR检测方法

（12）发明专利申请

（21）申请号 CN200710175518.9 （22）申请日 2007.09.30 （71）申请人 中国农业大学

地址 100083 北京市海淀区清华东路17号136信箱

（10）申请公布号 CN101153340A

（43）申请公布日 2008.04.02

（72）发明人 许文涛;黄昆仑;罗云波;白卫滨;元延芳 （74）专利代理机构

代理人

（51）Int.CI

C12Q1/68;

权利要求说明书 说明书 幅图

（54）发明名称

一种用于鉴定未知基因序列的连接片断PCR检测方法

（57）摘要

本发明是利用PCR技术鉴定已知DNA序列

的两侧未知序列的方法。它是通过对已知序列的限制性内切酶位点进行酶切，回收酶切产物与一段带有酶切位点的一段特定序列(S序列)进行连接。连接后产物用两套巢式特异引物来进行扩增。其中两套引物的正向巢式引物分别选取已知序列上的常见启动子序列或者终止子序列，也可以是靠近未知边界的目的基因。其中两套引物的

反向巢式引物则取自只有一端有特异酶切位点的一段特定序列。使用上述引物进行PCR扩增，运用巢式引物进行PCR产物初步鉴定，最后对所得片断进行克隆和测序鉴定。本发明通过引入特定片断序列将对未知基因序列的扩增转化成了对已知序列的扩增，该发明技术设计简单可行，操作限制少，应用范围广，结果分析简便可靠，而且成本低廉。

法律状态

法律状态公告日2008-04-02 2008-05-28 2011-09-14

法律状态信息

公开

实质审查的生效

发明专利申请公布后的驳回法律状态

公开

实质审查的生效

发明专利申请公布后的驳回

权利要求说明书

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说明书

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